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POLYNUCLEOTIDES --- SEQUENCE ANALYSIS, DNA --- POLYNUCLEOTIDES --- SEQUENCE ANALYSIS, DNA

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I.1 Les Yersinia
Les bactéries du genre Yersinia appartiennent à la famille des entétobactériacées. Ces organismes pathogènes pour l’homme et les rongeurs sont responsables de maladies telles que la peste (Yersinia pestis) ou de yersinioses dont la gravité va d’une entérite (Yersinia enterocolitica) à une septicémie pouvant être mortelle (Yersinia pseudotuberculosis) (pour revue, voir Cornelis et coll., 1987b).
Plusieurs fonctions de virulence ont été identifiées chez les Yersinia :
- Deux gènes impliqués dans l’invasion des cellules épithéliales cultivées in vitro, inv et ail, ont été clonés à partir du chromosome de Y. pseudotuberculosis et de Y. enterocolitica (Isberg R. et coll., 1987 ; Miller VL et Falkow S., 1988).
- Y. pestis, Y. pseudotuberculosis et certaines souches de Y.enterocolitica synthétisent à partir du chromosome des protéines régulées par le fer et qui sont probablement impliquées dans la captation de fer au cours de l’infection (Carniel E. et coll., 1987 ; Heesemann J. et Grüter L., 1987).
- Y.enterocolitica sécrète, basse température, une toxine apparentée à l’entérotoxine ST de E.coli (Takao T. et coll., 1985).
- les souches virulentes deY.pestis produisent une coagulase et un activateur du plasminogène, tous les deux encodés par le gène pla situé sur un plasmide de 9.5kb qu’on ne trouve que chez les Y.pestis (Sodeinde O.A. et Goguen J.D., 1988) ; il faut signaler que dans cette même espèce, on trouve un troisième plasmide de 100 kb (Protsenko et coll., 1983).
- enfin, les trois espèces virulentes sécrètent en grande quantité un assortiment de protéines appelées Yops (pour « Yersinial Outer Membrane Proteins ») codées par un plasmide de 70 kb appelé pYv (cfr. figure 1).
La perte de cette dernière propriété est toujours associée à la perte de pathogénicité

Medical Laboratory Science --- Yersinia enterocolitica --- Sequence Analysis

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Chemistry, Analytical. --- Sequence Analysis. --- Analytical biochemistry. --- Biochimie analytique --- Analytical biochemistry

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Yersinia entercolitica est un agent de gastroenteritis rencontré assez fréquemment chez l’homme. Différents facteurs de virulence ont été identifiés chez cette bactérie. Parmi ceux-ci, certains sont codés par le chromosome : l’entérotoxine Yst, les fimbriae Myf, les internalines Inv et Ail, ainsi que la capacité de capter le fer ; tandis que d’autres sont codés par un plasmide de 70kb, appelé pYVe : la dépendance vis-à-vis des ions Ca[2+], la protéine YadA, les protéines Yops et la lipoprotéine YlpA. L’expression de ces fonctions de virulence est régulée par la protéine de type histone YmoA et/ou par la température et/ou par les ions Ca[2+].
Le fait que les gènes yst et myf soient uniquement transcrits durant la pahse tardive de croissance rendait intéressante l’idée d’étudier le facteur de régulation impliqué dans ce phénomène. Un des candidats potentiel était la protéine RopS, qui est un facteur σ de l’ARN polymérase, déjà décrit chez d’autres entérobactéries. Ce dernier contrôle l’expression de tout un régulon permettant à la bactérie d’acquérir une certaine résistance vis-à-vis de diverses agressions durant la phase stationnaire de croissance.
Ce travail a permis d’identifier un homologue de rpoS chez Y. enterocolitica et de cloner ce dernier à partir du chromosome.
Le gène rpoS de Y. enterocolitica a également été séquencé. Il possède une taille de 993pb et il code une protéine similaire aux autres facteurs σ, particulièrement aux facteurs RpoS identifiés chez d’autres entérobactéries. Les deux gènes entourant rpoS ont été identifiés. Le gène en amont de rpoS est similaire au gène nlpD d’E. coli qui code une lipoprotéine impliquée dans la survie de la bactérie durant la phase stationnaire. Le gène en aval de rpoS est similaire au gène mutS d’E. coli qui code une protéine corrigeant les désappariements au niveau de l’ADN.
Nous avons aussi construit un mutant Y. enterocolitica rpoS par échange allélique afin d’étudier l’influence de RpoS sur l’expression de différents facteurs de virulence. Il s’est avéré que l’expression des deux gènes exprimés durant la phase tardive, yst et myf, était significativement réduite. Ce résultats semble donc suggérer l’intervention du facteur RpoS dans la régulation de l’expression de ces gènes.
Enfin, nous avons tenté de complémenter cette mutation en apportant en trans la protéine RpoS de Y. enterocolitica. Malheureusement, nous n’avons pas réussi à restaurer la production de Yst à un taux identique à celui observé chez la souche sauvage de Y. enterocolitica. La cause de cet échec est discutée plus en détail dans le présent travail.

Yersinia enterocolitica --- Cloning, Molecular --- Sequence Analysis --- Medical Laboratory Science

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Molecular biology --- Gene mapping --- Genetics --- Technique --- Gene mapping. --- Nucleotide sequence. --- Genetics. --- Genome. --- Sequence Analysis, DNA. --- Technique. --- Sequence analysis, dna. --- Genetics - Technique