Abstract | Keywords | Export | Availability | Bookmark

Choose an application

• Reference Manager
• EndNote
• RefWorks (Direct export to RefWorks)

The platelet-derived growth factor (PDGF) acts by binding to its tyrosine kinase receptor, thus activating many signalling pathways leading to cellular proliferation, migration and differentiation. In this study, we were interested in the PDGF signalling pathway depending on phosphatidylinositol 3-kinase (PI3kinase), the serine/threonine kinase Akt/PKB and sterol regulatory element-binding protein (SREBP). This pathway leads to the expression of many genes coding for lipogenic enzymes including stearoyl-coenzyme A desaturase (SCD). This enzyme catalyses the Δ9-cis desaturation of saturated fatty acids, thus generating mono unsaturated fatty acids (MUFA). These are implicated in the biosynthesis of membrane phospholipids.By using two shRNA targeting SCD (shSCD) and lentiviral particles, we were capable of reducing SCD expression in human fibroblasts as well as in glioblastoma cells. First, by using a radio-labelled thymidine incorporation assay, we observed a loss of proliferative effect of PDGF on fibroblast expressing shSCD. We also observed that expression of shSCD leads to a decrease in fibroblast migration. To identify how the shSCD can cause these effects, we studied the phosphorylation of some PDGF-regulated proteins. By western blot analysis, we observed that Akt, Erk and Stat3 were phosphorylated to a lesser extent in the presence of shSCD compared to normal cells; while there was no effect for PDGFRβ, Stat5 and PLCγ1. Because of the role played by SCD in the production of MUFA which are important for cellular membrane biosynthesis, we wanted to study the effect of shSCD on membrane fluidity by using the FRAP technology. Our first results do not show any important effect. Finally, as SCD expression was shown to increase in some tumor cells, we investigated whether our shSCD can affect the proliferation of glioblastoma cells. Our results show that there is no effect of shSCD on the proliferation of these cells.To complete this study, we would like to test the localization of PDGFR in cells expressing shSCD and see if there are any differences compared to cells which do not express shSCD. The localization of PDGFR in rafts or non-rafts domains of the membrane might be important for cellular signalling. Altogether, our results suggest that SCD plays an important role in the response of human fibroblasts to PDGF Le PDGF (« Platelet-derived growth factor ») est un facteur de croissance qui agit en se liant sur un récepteur à activité tyrosine kinase permettant ainsi l’initiation de diverses voies de signalisation qui mènent à la prolifération, la migration et la différenciation cellulaire. Dans cette étude, nous nous sommes intéressés à la voie de signalisation du PDGF dépendant de la phosphatidylinositol 3-kinase (PI3kinase), de la sérine/thréonine kinase Akt/PKB et de SREBP (« Sterol regulatory element-binding protein »). Cette voie mène à l’expression de plusieurs gènes codant pour des enzymes lipogéniques telle que la stéaroyl-coenzyme A désaturase (SCD). Cette enzyme catalyse la désaturation Δ9-cis d’acides gras saturés, ce qui génère des acides gras mono-insaturés. Ceux-ci sont nécessaires entre autres pour la synthèse des phospholipides membranaires. A l’aide de deux shRNA ciblant SCD (shSCD) et par l’utilisation de lentivirus, nous sommes parvenus à réduire l’expression de SCD dans des fibroblastes humains et dans des cellules de glioblastomes. Par western blot, nous avons observé qu’en présence de shSCD, la phosphorylation de certaines protéines appartenant à la signalisation du PDGF était réduite (Akt, Erk, STAT3) ; tandis que pour d’autres protéines, il n’y avait pas changement (PDGFRβ, STAT5, PLCγ, SHP2). Grâce à un test d’incorporation de thymidine tritiée, nous avons pu mettre en évidence une perte de l’effet prolifératif du PDGF sur des fibroblastes exprimant les shSCD ; mais pas sur les cellules de glioblastomes. De plus, la migration des fibroblastes est également réduite en présence de shSCD. La protéine SCD étant impliquée dans la synthèse des acides gras insaturés qui sont présents dans la membrane plasmique, nous avons étudié l’effet des shSCD sur la fluidité membranaire par la technique du FRAP. Les premiers résultats obtenus n’ont pas montré d’effet majeur.Nous avons ainsi montré l’importance du rôle de SCD dans la signalisation, la prolifération et la migration des fibroblastes humains en réponse au PDGF

Platelet-Derived Growth Factor --- Receptors, Platelet-Derived Growth Factor --- Stearoyl-CoA Desaturase --- Humans --- Sterol Regulatory Element Binding Proteins --- Cell Membrane