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The Research Unit for Tropical Diseases of the ICP performs, since several years, studies on Trypanosoma brucei, responsible for sleeping sickness in tropical Africa, with the aim to find new ways in preparing drugs.
These studies are based on an interesting property of this flagelled protest : the bloodstream form is completely dependant on glycolysis for his energetic needs ; moreover, in Trypanosoma brucei, glycolysis takes place in a specialized organell, the glycosome. This organell belongs to the family of microbodies that also includes the peroxisomes.
Several studies allowed to identify genes encoding proteins involved in the biogenesis of the glycosome.
our research concerned one of these proteins : PEX7, a cytosolic receptor involved in the import into the peroxisomal matrix of proteins carrying a PTS-2 type of glycosome targeting signal. Previous research on this proteins allowed to clone and characterise the gene. Tests of overexpression in Escherichia coli were not successful : the protein always appeared to be insoluble. We tried the overexpression of the protein in mammalian cells. The protein is present in the soluble fraction but we did not success in purifying it using standard protocols.
We also tried to demonstrate the interaction between PEX7 and proteins presenting a PTSQ-2 signal and involved in the glycolysis in Trypanosoma brucei. We did so by using the two-hybrid system in yeast. This was done to validate the system and then to search in a genomic bank other proteins interacting with PEX7. Several plasmidic constructs were used to transform the yeast and test the expression of reporter genes on selective media (PEX7, PEX5 and glycolytic enzymes). We also tested the expression of the β-glacactosidase gene. Finally, we measured the expression of the proteins in several clones.
All these experiments were not conclusive and led us to conclude that the two-hybrid system is not the ideal system to study the interaction of proteins with PEX7 L’Unité de Recherche sur les Maladies Tropicales de l’ICP conduit depuis plusieurs années des études sur Trypanosoma brucei, l’agent responsable de la maladie du sommeil en Afrique tropicale, dans le but de découvrir des nouvelles voies d’élaboration de médicaments. Ces études sont basées sur une propriété intéressante de ce protiste flagellé. Celui-ci est en effet entièrement dépendant de la glycolyse pour ses besoins énergétiques quant il circule, dans le sang de l’homme. De plus, chez T. brucei, la glycolyse se déroule dans un organite spécialisé, le glycosome.
Cet organite fait partie de la famille des microcorpuscules à laquelle appartiennent notamment les peroxysomes. Différentes études menées sue ceux-ci ont abouti à l’identification des gènes codant les protéines impliquées dans leur biogenèse.
Notre travail porte sur l’étude d’une de ces protéines, le récepteur PEX7. C’est une protéine cytosolique impliquée dans l’importation cers la matrice peroxisomale des protéines possédant un signal d’importation de type PTS-2.
l’étude de cette protéine réalisée dans l’unité, a mené au clonage et à la caractérisation de son gène. Différentes tentatives de surexpression de la protéine dans Escherichia coli ont également été menées mais malheureusement la protéine se présentait essentiellement sous forme insoluble, quelles que soient les conditions d’expression testées. Nous avons donc tenté de surexprimer la protéine dans des cellules de mammifères. La protéine est présente dans la fraction soluble mais nous n’avons pu la purifier dans des conditions normales.
L’autre partie de notre travail consistait à démontrer qu’il y a bien interaction entre la protéine PEX7 et différentes enzymes glycolytiques de T. brucei possédant un signal PTS-2, via le système double hybride chez la levure. Le but était de valider le système pour pouvoir ensuite rechercher dans une banque d’ADNc d’autres protéines interagissant avec PEX7. Différentes constructions plasmidiques (PEX7, PEX5 et enzymes de la glycolyse) ont été utilisées pour transformer des levures et tester l’expression de leurs gènes rapporteurs sur différents milieux sélectifs. Nous avons également réalisé un test pour vérifier l’expression du gène de la β-galactosidase. De même, nous avons mesuré l’expression des protéines dans les différents clones.
Ces différents tests n’ont hélas pas donné de résultats positifs certains, ce qui semble démontrer que le système double hybride n’est pas le système idéal pour le recherche des protéines interagissant avec PEX7

Trypanosoma brucei brucei --- Microbodies --- Receptors, Cytoplasmic and Nuclear

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Protein Binding --- Receptors, Cell Surface --- Receptors, Cytoplasmic and Nuclear --- Receptors, Drug --- Signal Transduction

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Nuclear receptors (Biochemistry) --- Steroid hormones --- Cellular signal transduction --- Receptors, Cytoplasmic and Nuclear. --- Signal Transduction. --- Cellular signal transduction. --- Receptors --- Receptors. --- Animal Biochemistry

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Cancer --- Oncogenes --- Transcription factors --- Tumor proteins --- Drug Design --- Genes, Tumor Suppressor --- Neoplasms --- Oncogene Proteins --- Receptors, Cytoplasmic and Nuclear --- Transcription Factors --- Chemotherapy --- physiology --- drug therapy

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Histology. Cytology --- Physiology of nerves and sense organs --- Nuclear receptors (Biochemistry) --- Cell receptors --- Récepteurs nucléaires (Biochimie) --- Récepteurs cellulaires --- Receptors, Cytoplasmic and Nuclear --- Periodicals --- Périodiques --- Receptors, Cytoplasmic and Nuclear. --- Nuclear hormone receptors --- Receptors, Nuclear (Biochemistry) --- Receptors, Nuclear hormone --- Cytoplasmic Hormone Receptors --- Cytoplasmic Receptors --- Cytosol and Nuclear Receptors --- Intracellular Membrane Receptors --- Nuclear Hormone Receptors --- Nuclear Receptors --- Receptors, Cytoplasmic --- Receptors, Cytosol and Nuclear --- Receptors, Cytosolic and Nuclear --- Receptors, Intracellular Membrane --- Receptors, Nuclear --- Receptors, Nuclear and Cytoplasmic --- Cytoplasmic and Nuclear Receptors --- Cytosolic and Nuclear Receptors --- Hormone Receptors, Cytoplasmic --- Hormone Receptors, Nuclear --- Nuclear and Cytoplasmic Receptors --- Membrane Receptors, Intracellular --- Receptors, Cytoplasmic Hormone --- Receptors, Nuclear Hormone --- Hormone receptors --- Transcription factors --- Hormones --- Biology. --- Cytology --- Cytoplasmic Receptor --- Nuclear Hormone Receptor --- Nuclear Receptor --- Hormone Receptor, Nuclear --- Receptor, Cytoplasmic --- Receptor, Nuclear --- Receptor, Nuclear Hormone