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Les cannabinoïdes sont des composés provenant de la plante Cannabis sativa et possédant, entre autres,une activité analgésique. Ces composés exercent leurs effets via des récepteurs aux cannabinoïdes appelés CBR. Il existe deux types de CBR actuellement reconnus : CBl et CB2. CBl est principalement situé au niveau du système nerveux central (SNC).Il se trouve du côté présynaptique, où il exerce un effet inhibiteur de la neurotransmission. Ceci permet entre autres de moduler négativement les signaux douloureux.Outre les composés de Cannabis sativa, il existe des endocannabinoïdes, qui jouent également un rôle inhibiteur y compris dans le contrôle des signaux douloureux.Les CBR appartiennent à la super famille des récepteurs couplés aux protéines G (RCPG) . Après activation par un agoniste, CBl recrute et active la protéine G de type a i/o.Cette protéine G a pour effet d'inhiber l'adénylatecyclase et l'accumulation d'adénosine monophosphate cyclique (AMPc) dans la cellule. CBl active également des mitogen activated protein kinases (MAP kinases) ; les extracellular-signal regulated kinases de type 1 et 2 (ERK 1/2), via phosphorylation de celles-ci. Enfin, CBl a un effet sur des canaux membranaires tels que des canaux calciques ou potassiques. Ces voies de régulation sont terminées par l'activité GTPase de la sous unité a.Les protéines regulators of G protein signaling (RGS) sont des protéines à activité GAP(GTPase activating protein), qui stimulent la fonction GTPase intrinsèque à la protéine G. Ainsi, les RGS peuvent entrainer une terminaison plus rapide de la signalisation d'un RCPG. Des études précédentes ont montré que la protéine RGS4 présente une activité GP sur CBl. Ainsi, RGS4 pourrait provoquer un arrêt rapide de l'effet analgésique des endocannabinoïdes.Le but de ce travail a été d'étudier l'influence que RGS4 peut avoir sur les différentes composantes de la signalisation de CBl. Nous avons principalement étudié l'activation de la protéine G et celle d'ERK 1/2.Pour cela, nous avons utilisé un modèle cellulaire permettant l'expression simultanée de RGS4 et de CBl : les HEK Flp-ln T-Rex RGS4 (human embryonic kidney ; cellules rénales embryonnaires humaines), exprimant RGS4 de manière stable et inductible, que nous avons transfectées de manière transitoire avec un plasmide contenant la séquence codant pour CBl.Bien que nous n'ayons pas reussi à mettre en évidence une influence de RGS4 sur l'activation CBl-dependente des protéines G au moyen de test de GTPyS, nous avons démontré un effet inhibiteur de RGS4 sur l'activation d'ERKl/2 par CBl. Cet effet semble dépendre de l'agoniste utilisé. Ceci confirme l'influence de RGS4 sur au moins une partie de la signalisation de CBl. Considérant les résultats supplémentaires obtenus dans le laboratoire montrant : 1) une diminution de signalisation CBl dans les douleurs neuropathiques et 2) un effet analgésique des inhibiteurs des RGS4, ce travail suggère l'implication d'interaction entre CBl et RGS4 dans le développement de ce type de douleur. CBl is a G protein coupled receptor (GPCR), and is the target of cannabinoids compounds, such as THC,or endocannabinoids anandamide and 2-arachydonoylglycerol (2-AG). One of its roles in the central nervous system is to negatively modulate the transmission of pain signals. The RGS4 protein is a GTPase activating protein (GAP),which role is to facilitate the termination of GPCR's signaling by stimulating the intrinsic GTPase function of Ga, thus inactivating the G protein. Some studies have shown that RGS4 is able to interact with CBl, as GAP.ln this work, we wondered which parts of CBl signalling were influenced by RGS4. We studied the activation of the G protein, and the activation of ERKl/2. We used two different synthetic agonists (HU210 and CP55940) and one inverse agonist (SR141716A) of CBl,and we wondered if the effets of RGS4 were ligand dependant .Our results seem to indicate that RGS4 does not influence the activation of the G protein, but does have an effect on the activation of ERKl/2.The phosphorylation rate of ERKl/2 is indicative of its activation. Using HU210 and CP55940, we observed an elevation of the phosphorylation rate of ERKl/2, but this rate seems lower when RGS4 is overexpressed in the cells.Furthermore, our data suggest that HU210 and CP55940 do not induce the same effects on the activation of ERKl/2 in the presence of RGS4.SR141716A does not seem to have an effect on the phosphorylation rate of ERKl/2,but the presence of RGS4 enabled its inverse agonsist effects: the phosphorylation rate of ERKl/2 was lowered. These results tend to confirm that RGS4 has an influence on CBl signalling,and might be considered as a target in the treatment of some chronic pain.

Receptor, Cannabinoid, CB1 --- RGS4 protein --- Cannabis