Choose an application

• Reference Manager
• EndNote
• RefWorks (Direct export to RefWorks)

579.61 --- 579.61 Medical microbiology. Pathogenicity of microorganisms --- Medical microbiology. Pathogenicity of microorganisms --- Academic collection

Choose an application

• Reference Manager
• EndNote
• RefWorks (Direct export to RefWorks)

Een groot deel van de pathologie waarmee de omnipracticus dagelijks wordt geconfronteerd bestaat uit infectieziekten. In dit werk worden de meest voorkomende ziekteverwekkers vanuit verschillende invalshoeken benaderd. Daarbij was het de bedoeling een aantal hedendaagse raadgevingen omtrent diagnose en behandeling te overlopen. De voorgestelde behandelingen hebben enkel een aanbevelend karakter en dienen geïnterpreteerd te worden volgens de specifieke noden van de individuele patiënt. Uiteraard is dit boek zowel in zijn opzet als in zijn uitwerking beperkt. Het geeft immers geen volledig overzicht van de microbiologie noch van alle alternatieve behandelingen.

579.61 --- 579.61 Medical microbiology. Pathogenicity of microorganisms --- Medical microbiology. Pathogenicity of microorganisms --- 608.3 --- microbiologie (gez)

Choose an application

• Reference Manager
• EndNote
• RefWorks (Direct export to RefWorks)

Lysozymes zijn belangrijke componenten van het aangeboren defensiesysteem bij dieren en vertonen een antibacteriële werking door de hydrolyse van peptidoglycaan, de belangrijkste structurele component van de bacteriële celwand. Gezien het wijd verspreide voorkomen van verschillende types van lysozymes in het dierenrijk, en hun doeltreffendheid als antibacteriële agentia, is het niet verwonderlijk dat bacteriën op hun beurt strategieën ontwikkeld hebben om aan de lytische werking van lysozymes te ontsnappen. Zo wordt de peptidoglycaanlaag van Gram-negatieve bacteriën afgeschermd door hun buitenmembraan, en maken sommige bacteriën structuurvarianten van peptidoglycaan aan die ongevoelig zijn voor lysozym. Een meer recent ontdekte strategie is de productie van specifieke lysozym inhibitoren. In 2001 werd voor het eerst een specifieke proteïne lysozym inhibitor Ivy (Inhibitor van vertebraat lysozym) geïdentificeerd in het periplasma van Escherichia coli. Aangezien inactivatie van het ivy gen in E. coli resulteert in een snelle en volledige afdoding van de bacteriën in speeksel (in tegenstelling tot de overeenkomstige Ivy producerende stam die zelfs in staat was te groeien), kan Ivy beschouwd worden als een belangrijke factor in de bescherming van E. coli tegen gastheerlysozym wanneer het buitenmembraan van deze bacterie gepermeabiliseerd is. De beperkte verspreiding van ivy homologen in andere bacteriën wierp echter vragen op over de bredere relevantie van lysozym inhibitoren in bacterie-gastheer interacties. De globale doelstelling van dit werk was daarom te zoeken naar andere bacteriële lysozym inhibitoren specifiek voor c- of g-type lysozymes. In een eerste deel werd een algemene procedure op punt gesteld om nieuwe, bacteriële lysozym inhibitoren op te sporen. Deze procedure werd in eerste instantie gebruikt om Ivy uit E. coli op te zuiveren. Vervolgens werden Ivy homologen van Shigella flexneri, Klebsiella pneumoniae en Yersinia enterocolitica met succes geïsoleerd, opgezuiverd en geïdentificeerd, hetgeen de gevoeligheid en bruikbaarheid van de procedure in de zoektocht naar nieuwe bacteriële lysozym inhibitoren aantoont. Een screen van periplasmatische proteïneëxtracten van gram-negatieve bacteriën voor inhibitie van zowel kippeëi-eiwit lysozym (HEWL) als ganzenei-eiwit lysozym (GEWL) leverde duidelijke indicaties voor de aanwezigheid van een GEWL inhibitor in Aeromonas hydrophila en een Ivy-deficiënte E. coli mutant. Bovendien vertoonden de extracten van Enterobacter aerogenes, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris en Salmonella Enteritidis (die geen van allen een ivy homologe sequentie in hun genoom herbergen) sterke HEWL inhibitorische activiteit, wat opnieuw de aanwezigheid van een type lysozym inhibitor, verschillend van Ivy suggereert. De verdere zuivering en identificatie van de component met HEWL inhibitorische activiteit uit het periplasma van S. Enteritidis bevestigde deze hypothese en de geïdentificeerde inhibitor werd omgedoopt tot PliC (Periplasmatische lysozym inhibitor van c-type lysozym). In een periplasmatisch extract van een pliC knock out mutant werd geen lysozym inhibitorische activiteit meer gedetecteerd. Bovendien bleek deze stam, in vergelijking met de overeenkomstige wildtype stam, gevoeliger te zijn voor lysozym in de aanwezigheid van het buitenmembraan permeabiliserende proteïne lactoferrin. PliC is verwant met een familie van proteïnen die gekenmerkt worden door een gemeenschappelijk geconserveerd COG3895 domein.  Voor drie voorspelde lipoproteïnen van deze groep werd de HEWL inhibitorische activiteit bevestigd, en bijgevolg werden deze voortaan aangeduid als MliC (Membraangebonden lysozym inhibitor van c-type lysozym) van respectievelijk E. coli, Pseudomonas aeruginosa en Salmonella Typhimurium. Gebruik makende van een nieuw ontwikkelde omgekeerde zymogram-methode werd bovendien in P. mirabilis een bijkomende periplasmatische (PliC) vertegenwoordiger gedetecteerd, geïsoleerd en geïdentificeerd. Al de geteste HEWL inhibitoren (Ivy van E. coli, MliC van E. coli, MliC van P. aeruginosa) zorgden voor een verhoogde HEWL tolerantie wanneer ze tot expressie werden gebracht in E. coli ivy mliC. In een laatste gedeelte werd de inductie van HEWL inhibitoren door de Rcs regulatieweg bestudeerd. Recent werd aangetoond dat Rcs een celwand stressrespons doet aanslaan na blootstelling aan β-lactam antibiotica, en microroosterdata hebben uitgewezen dat de expressie van ivy en mliC/pliC wordt opgereguleerd door deze regulatieweg in E. coli en S. Typhimurium. We konden aantonen dat hydrolyse van peptidoglycaan door lysozym ook de Rcs pathway induceert, met inbegrip van de lysozym inhibitoren. Bovendien bleek knockout van Rcs E. coli gevoeliger te maken voor lysozym, en deze gevoeligheid kon tenminste gedeeltelijk worden hersteld door overexpressie van de lysozym inhibitor Ivy. Deze resultaten verruimen het belang van de Rcs pathway als cellulaire respons op uiteenlopende soorten van celwandstress. Het wijdverspreide voorkomen van c-type lysozym in vertebraten laat vermoeden dat dit regulatiemechanisme van de productie van lysozym inhibitoren van belang kan zijn in de associatie van E. coli en S. Typhimurium met hun vertebrate gastheren. Lysozymes are ancient and important components of the innate immune system of animals that exert their antibacterial activity by hydrolysing peptidoglycan, the major bacterial cell wall polymer. In view of the widespread occurrence of different types of lysozymes in the animal kingdom, and their effectiveness as antibacterial agents, it is not surprising that bacteria have in turn evolved mechanisms to evade or subvert this threat. Besides the shielding action of the outer membrane of Gram-negative bacteria and the presence of modified peptidoglycan which is not sensitive for the lysozyme lytic action in some bacteria, the production of specific lysozyme inhibitors is a strategy that has been revealed more recently. In 2001, the first specific proteinaceous lysozyme inhibitor (Ivy, Inhibitor of vertebrate lysozyme) was discovered in the periplasm of Escherichia coli. Since inactivation of ivy in E. coli results in a rapid and complete eradication of the bacteria in saliva, while the parental Ivy-producing strain is even able to grow, Ivy is recognized as an important factor in the protection of E. coli against host lysozyme when the outer membrane is compromised. However, the rather restricted distribution of Ivy in only a few Gram-negative bacteria raised questions about its wider relevance in bacteria-host interactions. The overall objective of this study was therefore to investigate the existence of other bacterial lysozyme inhibitors specific for c- or g-type lysozymes. In a first part, a general procedure was optimised to screen for, and subsequently purify, lysozyme inhibitors. This procedure was validated by purifying Ivy from a periplasmic extract of an overexpressing E. coli strain. Subsequently, Ivy homologs from Shigella flexneri, Klebsiella pneumoniae and Yersinia enterocolitica were isolated, purified and identified with this procedure, proving its sensitivity and applicability in the search for new bacterial lysozyme inhibitors. A screening of periplasmic protein extracts of gram-negative bacteria for both hen egg white lysozyme (HEWL) inhibition and goose egg white lysozyme (GEWL) inhibition indicated the presence of a GEWL inhibitor in the periplasm of Aeromonas hydrophila and E. coli ivy knockout mutant. Moreover, periplasmic protein extracts of Enterobacter aerogenes, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris and Salmonella Enteritidis (all lacking an ivy homolog in their genome), had strong inhibitory activity on HEWL, suggesting the existence of a new type of lysozyme inhibitor. Subsequently, a lysozyme inhibitor, unrelated to Ivy of E. coli, was isolated from a periplasmic extract of S. Enteritidis, identified by mass spectrometry and designated as PliC (Periplasmic lysozyme inhibitor of c-type lysozyme). A pliC knockout mutant no longer produced lysozyme inhibitory activity and showed increased lysozyme sensitivity in the presence of the outer membrane-permeabilizing protein lactoferrin. PliC is related to a group of proteins with a conserved COG3895 domain. Three predicted lipoproteins of this group were demonstrated to inhibit HEWL, and accordingly renamed as MliC (Membrane bound lysozyme inhibitor of c-type lysozyme) of respectively E. coli, Pseudomonas aeruginosa and Salmonella Typhimurium. Moreover, making use of a newly developed reverse zymogram method, an additional periplasmic member of this protein family was detected, isolated and identified in P. mirabilis. All the tested HEWL inhibitors (Ivy from E. coli, MliC from E. coli, MliC from P. aeruginosa) conferred increased HEWL tolerance upon expression in E. coli ivy mliC. In the last part, the induction of HEWL inhibitors by the Rcs two-component system was studied. Rcs was recently shown to mediate a cell envelope stress response triggered by β-lactam antibiotics, and microarray analysis data indicated that both Ivy and MliC/PliC are part of the Rcs regulon in E. coli and Salmonella. We were able to demonstrate that peptidoglycan cleavage by HEWL also triggers the Rcs pathway, including the production of HEWL inhibitors. Furthermore, Rcs knockout increased the sensitivity of E. coli to lysozyme, and this sensitivity could be at least partly reversed by overexpression of the HEWL inhibitor Ivy. These results further extend the importance of the Rcs pathway as a response to address various types of cell wall damage. In view of the widespread occurrence of c-type lysozymes in vertebrates, this regulation of lysozyme inhibitor production is likely to be important for the association of E. coli and S. Typhimurium with vertebrate hosts. Isolatie, zuivering en karakterisatie van nieuwe bacteriële lysozym inhibitoren Lysozymes zijn belangrijke componenten van het aangeboren defensiesysteem van zowel vertebrate als invertebrate dieren. Ze vertonen antibacteriële activiteit door de hydrolyse te katalyseren van peptidoglycaan, de belangrijkste structurele component van de bacteriële celwand. Bacteriën hebben doorheen de evolutie op hun beurt strategieën ontwikkeld om aan de werking van deze voor hen levensbedreigende lysozymes te ontsnappen. Een recent ontdekt mechanisme is de produktie van proteïnen (lysozym inhibitoren) die met lysozymes binden en daardoor hun werking kunnen verhinderen. Bij de aanvang van dit werk was slechts één dergelijke lysozym inhibitor beschreven, in de bacterie Escherichia coli (Ivy, Inhibitor van vertebraat lysozym), en gelijkaardige proteïnen bleken slechts in een beperkt aantal andere bacteriën voor te komen. Vooral de afwezigheid van Ivy-achtige proteïnen in bacteriën die in nauwe interactie met mens en/of dier voorkomen (zoals ziekteverwekkende bacteriën) leek in tegenstrijd met een belangrijke rol voor deze lysozym inhibitoren als antwoord van bacteriën op de lysozymes van hun gastheer. De doelstelling van dit werk was daarom na te gaan of in bacteriën mogelijk nog andere lysozym inhibitoren voorkomen. In een eerste deel werd een procedure op punt gesteld om nieuwe bacteriële lysozym inhibitoren op te sporen en op te zuiveren. Deze procedure werd gevalideerd door opzuivering van de Ivy-achtige proteïnen uit Shigella flexneri, Klebsiella pneumoniae en Yersinia enterocolitica, waardoor meteen ook de inhibitorwerking van deze proteïnen kon worden aangetoond. Vervolgens werd een screening opgezet naar nieuwe bacteriële lysozym inhibitoren, waarbij gebruik werd gemaakt van verschillende types van lysozym. Dit leverde duidelijke indicaties op voor de aanwezigheid van nieuwe lysozym inhibitoren in een aantal Gram-negatieve bacteriën, die bovendien specificiteit vertoonden tegenover de gebruikte lysozymtypes. Zo werd ondermeer inhibitoractiviteit vastgesteld in een extract van Salmonella Enteritidis, een belangrijke voedselpathogeen die echter geen Ivy-achtig eiwit aanmaakt. Verdere zuivering en identificatie van deze component via de eerder ontworpen procedure bevestigde de aanwezigheid van een lysozym inhibitor, verschillend van Ivy. Deze inhibitor bleek deel uit te maken van een familie lysozym inhibitoren, met vertegenwoordigers in vele Gram-negatieve bacteriën, waaronder belangrijke pathogenen zoals Pseudomonas aeruginosa. Door de inhibitorproductie via genetische weg uit te schakelen of op te drijven, werd de lysozymgevoeligheid van de bacteriën respectievelijk verhoogd en verlaagd. De ontdekking van deze nieuwe lysozym inhibitoren ondersteunt de hypothese dat bacteriën deze inhibitoren hebben ontwikkeld om zich te wapenen tegen de lysozymes van hun gastheer. Lysozym inhibitoren vormen daarom potentieel een interessant doelwit voor de ontwikkeling van nieuwe antibacteriële agentia.

Academic collection --- 579.61 --- 577.15.042.2 --- Medical microbiology. Pathogenicity of microorganisms --- Enzyme inhibitors. Enzyme inactivation --- Theses --- 579.61 Medical microbiology. Pathogenicity of microorganisms

Choose an application

• Reference Manager
• EndNote
• RefWorks (Direct export to RefWorks)

Microbiology --- Medical microbiology --- Microbiologie médicale --- $ 9301 --- $ PDMC --- Microbiology. --- 579.61 --- Infectious Disease Medicine --- Medical microbiology. Pathogenicity of microorganisms --- 579.61 Medical microbiology. Pathogenicity of microorganisms --- Microbiologie médicale

Choose an application

• Reference Manager
• EndNote
• RefWorks (Direct export to RefWorks)

Microbiology. --- 579.61 --- 579.61 Medical microbiology. Pathogenicity of microorganisms --- Medical microbiology. Pathogenicity of microorganisms --- Infectious Disease Medicine --- Medical microbiology, virology, parasitology --- Microbiology