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In mice chronically infected with a virus, T lymphocytes undergo persistent activation and stimulation which results in a dysfunctional state known as "T cell exhaustion". In this state, T cells lack effector functions and are unable to proliferate. This loss of function has been attributed to the presence of inhibitory receptors. In several pathologies like chronic viral infection, graft or cancer, human T cells are also continuously exposed to their specific antigen. By analogy with the murine T cells observed in chronically infected mice, human T cells have also been described as exhausted. However the role of inhibitory receptors has not been proven in human T lymphocytes. We have proposed to reconsider this issue with in vitro expanded human T cells. To mimic antigen persistence, a protocol of repeated stimulations of human T cells has been developed. The T cells obtained with this protocol become dysfunctional, but the implication of inhibitory receptors has been ruled out. The dysfunctional T cells have been compared to their functional counterparts by transcriptome analysis. Several genes that were differentially expressed were identified. We decided to focus on 3 main candidates: TIMP3 and SPARC which are upregulated in dysfunctional T cells and ITK which is down regulated. I obtained dysfunctional T cells using the repeated stimulations protocol, either using stimulating T2 cells or stimulating dendritic cells, each of them loaded with a relevant antigenic peptide. I confirmed the upregulation of TIMP3 and SPARC genes in dysfunctional T cells and confirmed this increase at the protein level. This upregulation is particularly significant, as these candidate genes are not expressed in functional T cells. I also analyzed their expression in T cells extracted from several human pathologies samples and interestingly, I was able to demonstrate their expression in this context. I forced the expression of either TIMP3 or SPARC by lentiviral infection of functional T cells. On the other hand, I used polyclonal antibodies directed against TIMP3 and SPARC proteins, and evaluated the impact on T cell functions. This treatment allowed a slight increase in T cell functions in a single experiment. In order to identify the action mechanism of TIMP3 in T cell, I used chemical inhibitor to mimic its action by inhibiting its targets in functional T cells. I evaluated their functions, but no impact was noted. Regarding ITK, I forced its expression in functional T cells, which will undergo the repeated stimulation protocol. This will allow evaluating whether its expression is sufficient to maintain T cell functions. I also used chemical inhibitors to reproduce the loss of its expression; it induced a negative impact on T cells functions.In the future, if the implication of the candidate genes is confirmed, it will be possible to consider broader perspectives. For example, the transfer of T cells which would be genetically modified either to suppress or sustain the expression of the candidate genes could be considered. Lors d'infections murines chroniques, les lymphocytes T sont soumis à des stimulations permanentes qui entrainent l'apparition d'un état « épuisé ». Ce dysfonctionnement est dû à l'expression majorée de récepteurs inhibiteurs. Dans diverses pathologies comme les infections virales chroniques, le cancer ou les greffes, les lymphocytes T humains subissent ce même type d'exposition continue à leur antigène. Par analogie avec les pathologies murines, les lymphocytes T humains ont également été qualifiés d' « épuisés ». Chez l'homme, toutefois, l'implication des récepteurs inhibiteurs n'a pas été démontrée. Afin d'imiter la persistance de l'antigène, un protocole de stimulations répétées des lymphocytes T a été mis en place. Les lymphocytes T obtenus sont dysfonctionnels, mais l'implication des récepteurs inhibiteurs a été exclue. Une analyse de transcriptome a été réalisée pour comparer ces lymphocytes T dysfonctionnels aux lymphocytes T fonctionnels. Plusieurs gènes différentiellement exprimés ont été identifiés. Nous nous sommes focalisés sur 3 candidats : TIMP3 et SPARC qui sont surexprimés dans les lymphocytes T dysfonctionnels, et ITK qui voit au contraire son expression diminuer. J'ai obtenu des lymphocytes T dysfonctionnels par ce protocole, en employant d'autres types de cellules stimulantes : des cellules T2 ou des cellules dendritiques en tant que cellules stimulantes. J'ai confirmé la surexpression des gènes TIMP3 et SPARC dans les lymphocytes T dysfonctionnels, et mis en évidence leur expression protéique. J'ai également détecté leur expression dans des lymphocytes T extraits de diverses pathologies humaines. Concernant les gènes candidats, j'ai agi sur leur expression génique d'une part et sur leurs fonctions protéiques d'autre part. Concernant TIMP3 et SPARC, j'ai induit leur expression dans des lymphocytes fonctionnels par infection lentivirale. Dans le cas d'ITK, j'ai induit son expression dans des lymphocytes T fonctionnels qui seront soumis au protocole de stimulation chronique. Cela permettra d'évaluer si le maintien de son expression est suffisant pour protéger les lymphocytes T de l'état dysfonctionnel. J'ai employé des anticorps polyclonaux dirigés contre les protéines TIMP3 et SPARC. Ils ont permis une légère augmentation des fonctions lymphocytaires dans une expérience unique. Par ailleurs, afin d'identifier le mécanisme d'action de TIMP3 dans les lymphocytes T, j'ai mimé son action par l'inhibition de ses cibles dans des lymphocytes T fonctionnels. Cela n'a eu aucun impact sur les fonctions lymphocytaires. Concernant ITK, j'ai employé un inhibiteur chimique qui a exercé un impact négatif sur les fonctions lymphocytaires. A l'avenir, si l'implication des protéines candidates TIMP3 et SPARC se confirme, des perspectives plus larges seront envisageables. Au vu de leur action inhibitrice sur le système immunitaire, il serait intéressant d'inhiber leur action dans le cas d'infections virales chroniques ou de cancer. Au contraire, leur présence constituerait un atout dans le cas de pathologies auto-immunes ou de greffes. Si leur implication est infirmée, il serait intéressant de considérer les autres gènes candidats identifiés par l'analyse de transcriptome. L'intervention d'autres mécanismes également, épigénétiques par exemple, ne doit pas être négligée.

T-Lymphocytes --- Lymphocyte Function-Associated Antigen-1