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ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY --- Microbiological techniques --- ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY. --- Microbiological techniques. --- Enzyme-linked immunosorbent assay.

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Enzyme-linked immunosorbent assay. --- Hemagglutinins --- Sialic acids --- Transferrin --- Analysis.

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Enzyme-Linked Immunosorbent Assay --- Biological Markers --- Breast Neoplasms --- Autoantibodies

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Un des volets de notre travail consistait à déterminer le seuil de la sensibilité de notre ELISA pour le dosage de l’IgA sérique humaine.
Cette technique immunoenzymatique que nous avons utilisé semble être sensible ; elle permet la détection de l’ordre de 15 ng d’IgA par ml.
D’après nos résultats, elle présente également une bonne reproductibilité, aussi bien qu’inter-essai. Par ailleurs, nous avons comparé notre technique vis-à-vis d’une autre méthode qui est actuellement bien reconnue, l’immunonéphélémétrie, afin de vérifier la fiabilité de nos résultats. Pour cela, nous avons dosé la concentration de l’IgA dans 60 échantillons de sérum humain par les 2 méthodes, l’immunonéphélométrie et ELISA. Les échantillons dosés contenaient des cas pathologique (déficit en IgA, myélome). Ces derniers pourraient donc être considérés comme une population hétérogène du point de vue de la concentration et de la taille moléculaire. Entre les résultats des 2 méthodes, nous avons obtenus un coefficient de corrélation de 0,892. Sachant que ces sérums représentent une population hétérogène du point de vue de la taille moléculaire d’une part, et qu’il existe un facteur de correction propre à chaque méthode pour la forme polymétrique d’autre part, l’obtention d’un coefficient de corrélation de 0,892 pourrait être considéré comme valable et significatif.
Une des difficultés importantes rencontrées pour le dosage de l’IgA est la sensibilité des diverses méthodes immunologiques aux différences de tailles moléculaires de l’IgA. En effet, les diverses méthodes immunologiques pour le dosage de l’IgA mettent en évidence le comportement différent des formes monomérique prise comme étalon.
Dans les différentes techniques l’influence de la taille moléculaire se manifeste communément par une sous-estimation des formes polymériques par rapport à la forme monomérique ; la concentration des IgA polymériques doit être multipliée par un facteur de correction. Le facteur de correction semble être propre à chaque type de technique. Une des explications possibles serait que le milieux de la technique utilise la configuration spatiale des différentes formes moléculaires d’IgA.
Dans notre technique de dosage, d’autres facteurs pourraient également jouer un rôle au niveau de l’influence de la taille sur le dosage de l’IgA. En effet, lorsqu’on incube, dans une plaque d’ELISA couverte d’ACs anti-IgA, de l’IgA polymérique, de part sa taille, celle-ci pourrait provoquer un effet d’inhibition stérique et de fait restreindre le nombre de molécules d’IgA qui pourraient se fixer sur la plaque couverte d’ACs. On pourrait également envisager que certains déterminants antigéniques soient cachés.
Dans notre travail, le dosage de l’IgA est réalisé en utilisant des ACs polyclonaux. L’utilisation d’un AC monoclonal (ne reconnaissant qu’un seul déterminant antigénique) pourrait apporter d’autres variations au niveau du facteur de correction pour les formes polymériques.
De même, les ACs polyclonaux que nous avons utilisés sont anti-chaîne alpha de la forme monomérique, il serait intéressant de doser les IgA en utilisant des Cs monoclonaux anti-plgA.
De plus, d’après nos résultats, il est possible qu’il y ait une différence de comportement des formes polymériques des 2 sous-classe d’IgA. Une explication possible est celle des différences de déterminants antigéniques via la structure de la chaîne alpha des 2 sous-classe.
De même, au sein d’une même sous-classe (2 myélomes à IgA1) entre une forme dimérique pure et un mélange de formes polymériques (di-, tri- et tétramères d’IgA), le facteur de correction varie entre 1,58 ± 0, 017 et 1,68 ± 0,019 respectivement.
Il est difficile de tirer des conclusions, sachant que la proportion des différentes formes polymériques pourrait influencer le facteur de correction d’un mélange à l’autre.
D’après les données de la littérature (Delacroix 1982, Havez, 1972 ; Heremans, 1974 ; Peppard, 1979) et nos résultats, l’influence de la taille moléculaire pour le dosage de l’IgA semble être évidente.
Par ce travail, nous avons donc confirmé les travaux préalablement réalisés concernant l’influence de la taille moléculaire. Nous avons également constaté qu’avec ELISA le facteur de correction pour la forme polymérique n’est pas très élevé en comparaison aux autres techniques sensibles.
Malgré le fait que nous soyons loin d’avoir résolu le problème d’hétérogénéité de tailles de l’IgA, notre technique pourrait être utilisée pour mesurer la concentration de différentes tailles moléculaires de l’IgA dans des fractions de gradient de sucrose des sérums de patients avec des pathologies variées. Grâce à sa sensibilité, elle pourrait être utilisée pour le dosage de l’IgA dans divers milieux biologiques (salives, biles, liquide céphalorachidien, liquide de lavage bronchique,…) où les concentrations en IgA sont très peu élevées.
En conclusion, nous sommes parvenus à mettre sur pied une technique de dosage sensible de l’IgA. Ce dosage présente les mêmes avantages du point de vue de la sensibilité (de l’ordre du ng/ml) et du facteur de correction pour la forme polymérique (de même ordre de grandeur) que ceux du RIA. De plus, il permet d’éviter certains inconvénients inhérents aux dosages RIA (problèmes de protections, coût, appareils, stockage et élimination des déchets).
L’étape suivante qui pourrait être envisagée pour élucider davantage les problèmes liés au facteur de correction des formes polymériques de l’ IgA serait de réaliser le dosage en utilisant des Acs monoclonaux anti-IgA.

Immunoglobulin A --- Enzyme-Linked Immunosorbent Assay --- Medical Laboratory Science

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WOUNDS AND INJURIES --- CRITICAL CARE --- ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY --- IMMUNOLOGIC TECHNICS --- FIBRONECTINS --- WOUNDS AND INJURIES --- CRITICAL CARE --- ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY --- IMMUNOLOGIC TECHNICS --- FIBRONECTINS