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L’Essai de stimulation locale des ganglions lymphatiques: BrdU-ELISA (ELGL: BrdU-ELISA) est une variante non radioactive de la méthode ELGL qui vise à identifier les substances chimiques sensibilisantes et à mesurer la prolifération lymphocytaire qu’ils induisent dans les ganglions lymphatiques auriculaires. Cette méthode décrite chez la souris  se base sur la quantification de la 5-bromo-2- désoxyuridine (BrdU), un analogue of thymidine, dans l’ADN des lymphocytes, comme indicateur de cette prolifération. Quatre animaux au minimum sont employés par groupe de dose, avec au minimum trois concentrations de la substance d'essai, plus un groupe contrôle négatif traité avec le véhicule seul, et un contrôle positif, au besoin. Le protocole expérimental dure 6 jours. Ensuite, les animaux sont euthanasiés et une suspension unicellulaire de cellules de ganglions lymphatiques (CGL) est préparée. La procédure de dispersion des CGL est une étape cruciale, en particulier pour les ganglions lymphocytaires très petits chez le animaux du groupe contrôle négatif. Ensuite la BrdU dans l’ADN des lymphocytes est quantifiée à l’aide d’un kit de dosage ELISA ou par cytométrie de flux (FCM). L’essai inclut des mesures (pesée, BrdU) et des observations cliniques quotidiennes. Les résultats sont exprimés par l’Indice de Stimulation (IS) obtenu par calcul à partir des indices moyens de marquage BrdU pour les différents groupes. Un SI ≥1.6 pour la méthode ELISA ou un SI ≥2.7 pour la cytométrie de flux justifie l’évaluation de la substance d’essai comme sensibilisant potentiel.

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La méthode d'essai EASZY (Endocrine Active Substances using Zebrafish embrYos) est une méthode de dépistage in vivo de type mécanistique, conçue pour détecter les perturbateurs endocriniens agissant comme agonistes des récepteurs des œstrogènes (estrogen receptors, ER), en induisant l'expression de la protéine fluorescente verte (Green Fluorescent Protein, GFP) sous le contrôle du promoteur du gène cyp19a1b. L'essai EASZY permet de détecter l'activité œstrogénique de produits chimiques sur des embryons de poisson-zèbre transgénique tg(cyp19a1b:GFP) exposés pendant 96 heures aux stades du développement embryonnaire. À la fin de l'expérience, la fluorescence de chaque éleuthéroembryon nouvellement éclos est mesurée au microscope à fluorescence. Le crâne du poisson-zèbre étant transparent aux premiers stades de son développement, la GFP est observée, imagée et quantifiée in vivo. L'intensité de fluorescence est quantifiée au moyen d'un logiciel d'analyse d'image.

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This document provides the second edition of Guidance Document 23 on Aqueous-Phase Aquatic Toxicity Testing of Difficult Test Chemicals. Whilst this guidance is targeted towards tests described by the OECD Test Guidelines identified it may also be relevant to other tests. The guidance relates to the practical aspects of carrying out valid tests with "difficult" test chemicals and mixtures and presenting the results. The guidance is considered to reflect good practice but it is important to recognise that some test chemicals and mixtures will present specific scientific and technical issues that may fall outside its scope. This document is divided into five substantive sections covering guidance for carrying out a preliminary assessment of test chemical stability; general considerations on selection of exposure systems; stock and test solution preparation and exposure systems; sampling of test solution for analysis; and calculating and reporting test results.

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