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This Test Guideline is designed to assess the effects of prolonged exposure of chemicals to the sediment-dwelling larvae of the freshwater dipteran Chironomus sp. First instar chironomid larvae are exposed to at least five concentrations of the test chemical in sediment - water systems. The test substance is spiked into the sediment and first instar larvae are subsequently introduced into test beakers in which the sediment and water concentrations have been stabilised. Chironomid emergence and development rate is measured at the end of the test. The maximum exposure duration is 28 days for C. riparius, C. yoshimatsui, and 65 days for C. tentans. The limit test corresponds to one dose level of 1000 mg/kg. Larval survival and weight may also be measured after 10 days if required (using additional replicates as appropriate). The study report should include the development time and the total number of fully emerged midges (sex and number are recorded daily), the observation of any abnormal behaviour the number of visible pupae that have failed to emerge and any egg masses deposition. The data are analysed either by using a regression model in order to estimate the concentration that would cause x % reduction in emergence or larval survival or growth, or by using statistical hypothesis testing to determine a NOEC/LOEC.
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L’Essai de stimulation locale des ganglions lymphatiques: BrdU-ELISA (ELGL: BrdU-ELISA) est une variante non radioactive de la méthode ELGL qui vise à identifier les substances chimiques sensibilisantes et à mesurer la prolifération lymphocytaire qu’ils induisent dans les ganglions lymphatiques auriculaires. Cette méthode décrite chez la souris se base sur la quantification de la 5-bromo-2- désoxyuridine (BrdU), un analogue of thymidine, dans l’ADN des lymphocytes, comme indicateur de cette prolifération. Quatre animaux au minimum sont employés par groupe de dose, avec au minimum trois concentrations de la substance d'essai, plus un groupe contrôle négatif traité avec le véhicule seul, et un contrôle positif, au besoin. Le protocole expérimental dure 6 jours. Ensuite, les animaux sont euthanasiés et une suspension unicellulaire de cellules de ganglions lymphatiques (CGL) est préparée. La procédure de dispersion des CGL est une étape cruciale, en particulier pour les ganglions lymphocytaires très petits chez le animaux du groupe contrôle négatif. Ensuite la BrdU dans l’ADN des lymphocytes est quantifiée à l’aide d’un kit de dosage ELISA ou par cytométrie de flux (FCM). L’essai inclut des mesures (pesée, BrdU) et des observations cliniques quotidiennes. Les résultats sont exprimés par l’Indice de Stimulation (IS) obtenu par calcul à partir des indices moyens de marquage BrdU pour les différents groupes. Un SI ≥1.6 pour la méthode ELISA ou un SI ≥2.7 pour la cytométrie de flux justifie l’évaluation de la substance d’essai comme sensibilisant potentiel.
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Les lignes directrices de l’OCDE pour les essais de produits chimiques est une collection d’environ 100 des plus pertinents tests reconnus à l’échelle internationale et méthodes d’essai utilisées par les gouvernements, l’industrie et des laboratoires indépendants afin d’identifier et de définir les dangers potentiels des nouvelles substances chimiques, préparations chimiques et mélanges chimiques. Cette batterie d’outils est particulièrement utile pour les professionnels dans les tests réglementaires de sécurité et les produits chimiques et produits chimiques de notification et d’enregistrement des produits chimiques. Ils peuvent également être utilisés pour la sélection et le classement des produits chimiques au cours du développement de nouveaux produits chimiques et de produits et de recherche en toxicologie. Ce groupe d’essais est consacré aux effets sur la santé.
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La méthode d'essai EASZY (Endocrine Active Substances using Zebrafish embrYos) est une méthode de dépistage in vivo de type mécanistique, conçue pour détecter les perturbateurs endocriniens agissant comme agonistes des récepteurs des œstrogènes (estrogen receptors, ER), en induisant l'expression de la protéine fluorescente verte (Green Fluorescent Protein, GFP) sous le contrôle du promoteur du gène cyp19a1b. L'essai EASZY permet de détecter l'activité œstrogénique de produits chimiques sur des embryons de poisson-zèbre transgénique tg(cyp19a1b:GFP) exposés pendant 96 heures aux stades du développement embryonnaire. À la fin de l'expérience, la fluorescence de chaque éleuthéroembryon nouvellement éclos est mesurée au microscope à fluorescence. Le crâne du poisson-zèbre étant transparent aux premiers stades de son développement, la GFP est observée, imagée et quantifiée in vivo. L'intensité de fluorescence est quantifiée au moyen d'un logiciel d'analyse d'image.
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The Test Guideline (TG) describes the use of liver S9 sub-cellular fraction (RT-S9) of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) as a metabolising system to determine the clearance (CL, IN VITRO, INT ) of a test chemical using a substrate depletion approach. Introduction of the test chemical to the RT-S9 incubation medium initiates the reaction. In order to collect samples at various time points, the reaction is terminated by transferring an aliquot of the medium to a stopping solution. The decrease of the test chemical concentration from the incubation vial is measured with a validated analytical method and used to determine the CL, IN VITRO, INT. The value obtained can then be used to improve in silico predictions of the test chemical bioaccumulation in fish.
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This document provides the second edition of Guidance Document 23 on Aqueous-Phase Aquatic Toxicity Testing of Difficult Test Chemicals. Whilst this guidance is targeted towards tests described by the OECD Test Guidelines identified it may also be relevant to other tests. The guidance relates to the practical aspects of carrying out valid tests with "difficult" test chemicals and mixtures and presenting the results. The guidance is considered to reflect good practice but it is important to recognise that some test chemicals and mixtures will present specific scientific and technical issues that may fall outside its scope. This document is divided into five substantive sections covering guidance for carrying out a preliminary assessment of test chemical stability; general considerations on selection of exposure systems; stock and test solution preparation and exposure systems; sampling of test solution for analysis; and calculating and reporting test results.
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