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L’iode est un élément essentiel de la synthèse des hormones thyroïdiennes, mais à forte dose, il exerce des effets inhibiteurs sur la fonction de la thyroïde. Dans des thyroïdes goitreuses, carencées en iode, l’iode, à forte dose, provoque aussi une nécrose cellulaire associée à une réaction inflammatoire. Le mécanisme par lequel l’iode est toxique n’est pas connu. Son étude serait facilitée par la mise au point d’un système de culture où les cellules thyroïdiennes sont morphologiquement et fonctionnellement proches de leur situation in vivo.
Notre travail a premier but la mise au point d’un système de culture de cellules thyroïdiennes de rats normaux et goitreux en monocouche polarisée. Pour cela, nous utilisons un système bicaméral qui consiste en deux chambres, d’accès indépendants, séparées par un filtre poreux.
Le deuxième but est l’étude sur les cellules thyroïdiennes des effets morphologiques et fonctionnels d’une forte dose d’iode.

Thyroid Gland --- Thyroid Gland --- Cell Culture Techniques --- Medical Laboratory Science

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Cocaine --- Fibroblasts --- Medical Laboratory Science --- Cell Culture Techniques

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Angiogenesis is the growth of new blood vessels and is an important natural process in the body. A healthy body maintains a perfect balance of angiogenesis modulators. In many serious disease states, however, the body loses control over antiogenesis. Diseases that are angiogensis-dependent result when blood vessels either grow excessively or insufficiently.* Tried-and-tested techniques written by researchers that developed them, used them, and brought them to fruition * Provides the ""builder's manual"" for essential techniques--a one-stop shop that eliminates needless searc

Neovascularization. --- Neovascularization, Physiologic --- Cell Culture Techniques --- methods --- Methods --- Blood-vessels --- Growth. --- Angiogenesis --- Growth --- Neovascularization, Physiologic - Laboratory Manuals --- Cell Culture Techniques - methods - laboratory manuals

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Depuis près de trois décennies, la technique de culture de moelle à long terme (CMLT) s’est développée et constitue toujours un outil de choix pour reconstituer, et analyser les paramètres biologiques de l’hématopoïèse in vitro. DEXTER et son équipe furent les principaux instigateurs de cette technique en 1976, quand ils développent la CMLT pour le modèle murin. Cette technique fut appliquée au matériel humain quelques années plus tard par GARTNER et KAPLAN. Ce travail présente une étude de la CMLT appliquée à des moelles osseuses de patients candidats à une autogreffe de moelle. Nous avons cultivé des moelles de donneurs sains à titre de contrôle afin d’établir les conditions normales de culture. Les groupes de patients sont constitués de patients atteints de Leucémie Myéloblastique Aigüe (LMA) et de patients atteints de pathologies lymphoïdes sans envahissement médullaire, (Lymphome non hodgkinien et maladie de Hodgkin). Chaque prélèvement est pratiqué lorsque ces patients sont en rémission complète après chimiothérapie. Les patients atteints de LMA présentent un retard de récupération hématologique après l’autogreffe. Un premier retard concerne le reprise de la granulopoïèse, qui entraîne une neutropénie prolongée avec, pour conséquence directe un risque accru d’infection, ce qui impose le maintien du patient en chambre stérile. En second lie, le délai prolongé pour qui les plaquettes sanguines atteignent un nombre satisfaisant reste un problème majeur. Ces patients peuvent présenter des signes d’hémorragies pouvant être létales, reçoivent donc des transfusions multiples de plaquettes, et leur hospitalisation est prolongée. Ce problème est particulièrement renforcé lorsque l’on sait que les moelles sont congelées en attendant le moment opportun pour la réinfusion. Certains auteurs mentionnent que les progéniteurs de la lignée mégacaryocytaire chez la souris sont particulièrement sensibles à la cryopréservation (Niskanen et al 1981). Tout l’intérêt d’étudier l’effet stimulant des interleukines sur les lignées granulocytaire et mégalocaryocytaire est dès lors justifié.
Trois orientations majeures constituent la charpente de cette étude.
1. Dans un premier temps, une mise au point de la CMLT est réalisée au départ de moelles fraîches, sans addition de cytokine. La croissance in vitro de ces moelles est estimée pour trois groupes de patients : les donneurs, les patients atteints de LMA et de lymphomes. Ceci afin de déterminer les conditions de culture de la moelle osseuse, culture pour lesquelles la valeur pronostique pourrait être déterminée.
2. Le modèle de a CMLT permet l’évaluation des effets de différents facteurs de croissance cellulaire ajoutés aux cultures. Des cytokines telles que les Grnulocyte-Colony Stimulating Factor (G-CSF), l’Interleukine 3 (IL-3), et l’Interleukine 6 (IL-6), seules ou en association ont été testées. Ces facteurs de croissance cellulaires pourraient améliorer la croissance hématopoïétique in vitro, et par extension servir d’outil thérapeutique pour améliorer la reprise hématologique des patients greffés.
3. L’effet de l’association de l’IL-3 et l’IL-6 est étudiée et évalué sur les cellules de la lignée mégacaryocytaire, pour tenter d’améliorer leur croissance qui est déficitaire chez les patients greffés atteints de LMA. La mise au point d’une technique d’immunodétection APAAP permet d’estimer l’effet des cytokines sur la thrombocytopoïèse.
Ce travail constitue le premier volet d’une étude qui verra son prolongement dans l’étude approfondie de la croissance médullaire in vitro après décongélation des moelles, ainsi que la prolongation des temps de culture en présence d’associations plus complexes de cytokines. Démontrer qu’il existe ou non une corrélation entre les valeurs de reprise médullaire in vitro et les chiffre de récupération en polymorphonucléaires neutrophiles et en plaquettes chez les patients après l’autogreffe demeure l’objectif principal

Cytokines --- Bone Marrow --- Cell Culture Techniques --- Transplantation, Autologous --- Medical Laboratory Science --- Hematopoiesis

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Ce travail s’inscrit dans le cadre du développement d’un protocole de thérapie génique de tumeurs cérébrales expérimentales chez le rat, basée sur le transfert adénoviral du gène suicide de la thymidine kinase du virus Herpes simplex. Afin d’étudier la toxicité de cette approche thérapeutique au niveau du tissu cérébral sain environnant la tumeur, la gène suicide a été transféré in vitro dans différentes cultures de cellules cérébrales de rat.
Trois types de culture ont été mises au point et caractérisées : les cultures astrocytaires pures, neuronales pures et les cultures mixtes.
Afin d’évaluer la capacité d’infecter et de transférer un gène étranger dans les astrocytes et les neurones, les différentes cultures ont été infectées par un adénovirus porteur du gène lac Z d’Escherichia coli codant la β-galactosidase (AdRSVβgal). La révélation histochimique de la β-galactosidase et les marquages immunocytochimiques permettent d’identifier les cellules infectées in vitro par AdRSVβgal. L’adénovirus transfère efficacement le gène de la β-galactosidase dans un grand nombre d’astrocytes (cellules mitotiques) ou de neurones (cellules quiescentes). Cependant, l’efficience d’infection est toujours plus élevée pour les astrocytes que pour les neurones.
Le gène de la thymidine kinase du virus Herpes simplex (HSVtk) a ensuite été utilisé comme gène suicide, et a été transféré dans les cellules en culture par l’adénovirus recombinant AdRSVtk. La protéine HSVtk confère aux cellules qui l’expriment une sensibilité au traitement par des analogues de nucléosides tels que le ganciclovir. In vitro, le test de cytotoxicité MTT ainsi que les marquages immunocytochimiques révèlent une forte toxicité du ganciclovir pour les astrocytes infectés par AdRSVtk, par rapport à celle observée sur les neurones infectés par le même adénovirus. Il suffit qu’un très faible pourcentage des astrocytes soit infectés par AdRSVtk pour observer une toxicité du ganciclovir sur l’ensemble de la culture astrocytaire.

Herpes Simplex --- Thymidine Kinase --- Gene Transfer --- Cell Culture Techniques --- Ganciclovir --- Medical Laboratory Science