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Rabbits --- Nephrotic Syndrome --- alpha-Macroglobulins

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The polymeric immunoglobulin receptor is the epithelial receptor that mediates the transport of polymeric IgA into mucosal secretions, including the respiratory tract.
In our laboratory, previous immunohistochemical studies have identified a decreased expression of pIgR in the bronchial epithelium from patients with severe chronic obstructive pulmonary disease. This decrease in pIgR strongly correlated with the polymorphonuclear neutrophil infiltration (assessed by immunolocalisation of one of their major proteinases, namely neutrophil élastase) of the bronchial mucosa. Moreover, the reduced expression of plgR also correlated with airflow limitation defining the disease. We have therefore theorized that neutrophils could affect the plgR integrity, its function and epithelial expression.
By electrophoretic analysis, we have shown that soluble SC was rapidly degraded by activated neutrophils, through a serine proteinases activity. Moreover, the three major neutrophils serine proteinases (neutrophil élastase, proteinases-3 and cathepsin G) were confirmed to cleave SC. In addition, purified neutrophil élastase could also cleave polymeric IgA into monomers, whereas S-IgA appeared more resistant. Futhermore, we have demonstrated by immunofluorescence that the pIgR on the apical surface of human bronchial epithelial cells, in polarised cultures, was also degraded by purified neutrophil elastase.
Moreover, we have shown that SC produced by cultured human bronchial epithelial cells (Calu-3 cell line and primary cultures of bronchial explants) is also revealed that purified neutrophil elastase is also able to cleave the cell-surface plR expressed by human bronchial epithelial cells in polarized culture. Finally, we showed that the cleavage of plgR/SC by neutrophil proteinases affects its role of transport of polymeric IgA Le pIgR est le récepteur responsable du transport de l’IgA polymérique dans les diverses secrétions externes. Ce récepteur est exprimé par les cellules épithéliales des muqueuses, notamment respiratoires.
Dans notre laboratoire, des études immunohistochimiques récentes ont montré que, dans l’épithélium bronchique de patients atteints de bronchopneumonie chronique obstructive sévère, l’expression du pIgR était fortement diminuée. De plus, cette diminution corrélée significativement avec l’infiltration tissulaire par les neutrophiles (estimée par immunolocalisation d’une de leurs protéases majeures, l’élastase neutrophile) dans la muqueuse bronchitique de ces patients. De plus, l’expression réduite du pIgR était également en bonne corrélation avec la dégradation des tests fonctionnels d’obstruction bronchitique définissant la maladie. Dés lors, nous avons examiné les mécanismes potentiels qui peuvent rendre compte de cette expression déficiente du pIgR. Il nous a semblé intéressant de tester si les produits de sécrétion des neutrophiles infiltrant les bronches de ces malades, peuvent affecter l’intégrité du pIgR , sa fonction ou sa production par l’épithélium.
Nous avons pu démontré par analyse électrophorétique que la composante sécrétoire (SC) purifiée est rapidement digérée en présence de surnageant de neutrophiles activés, via une activité sérine protéase. Nous avons alors confirmés que chacune des trois sérine protéases purifiées (l’élastase neutrophile, la protéase-3 et la cathepsine G), clivent la SC. De plus, l’élastase neutrophile purifiée clive aussi l’IgA polymérique en monomères, alors que l’IgA sécrétoire semble plus résistante. D’autre part, nous avons montré que la SC produite en culture épithéliale est également dégradée par les sérine protéases des neutrophiles. De plus, une analyse en immunofluorescence a révélé que l’élastase neutrophile purifiée dégrade aussi le pIgR de surface des cellules épithéliales bronchitiques humaines (cultures primaires et lignée Camu-3) en culture polarisée. Nous avons finalement montré que cette diminution du pIgR a des répercussions sur le transport transépithélial de l’IgA polymérique

Serine Endopeptidases --- Neutrophils --- Immunoglobulin A --- Secretory Component

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La thrombopénie auto immunitaire est une maladie sanguine qui peut-être sévère et, dans certains cas, même mortelle. C’est une maladie dans laquelle les plaquettes du patient sont détruites par son propre système immunitaire. La raison pur laquelle celui-ci détruit spécifiquement les plaquettes reste inconnue. Cependant, différents modèles animaux existent mais aucun n’est réellement adapté pour l’étude de cette maladie car ils ne sont pas limités à la thrombopénie auto immunitaire. Un nouveau modèle animal a donc été développé récemment dans notre laboratoire. Dans ce modèle, des souris sont immunisées par des injections hebdomadaires de plaquettes de rats. Ces souris développent une thrombopénie aigue et produisent des auto anticorps anti-plaquettes.
Dans ce travail, nous avons utilisé ce modèle animal pour produire des anticorps monoclonaux. Ces anticorps ont ensuite été soumis à une série de tests. Ces tests sont le Western blot, ELISA, la cytométrie et la rétraction du caillot. L’effet des anticorps ont notamment été testé in vivo. Nous avons ainsi confirmé que les souris soumises à cette immunisation produisent bel et bien des autos anticorps et que ces autos anticorps reconnaissent les plaquettes de rats et de souris. Nous avons aussi montré que ces anticorps, de classe IgM, reconnaissent CD42b et cd41 en Western blot.
Ensuite, nous avons montré que ces anticorps ont des effets pathogènes différent. Deux d’entre eux inhibaient la fonction plaquettaire in vitro tandis qu’ils étaient quatre à induire une thrombopénie in vivo. Finalement, nous avons constaté que ces anticorps reconnaissent mieux les plaquettes activées par la thrombine que les plaquettes non-activées .La raison n’en est, cependant, pas déterminée Autoimmune thrombocytopenic purpura is a bleeding disorder which can be severe and even life threatening. It is an autoimmune disease in which the patients own platelets are targeted and destroyed by his own immune system. The reason why the immune system targets self-platelets remains unknown. Different animal models of this disease, however, exist but none of these animal models are really suitable to study the disease because they are not restricted to immune thrombocytopenia. A new experimental model was therefore developed previously in our laboratory. In this model, mice are immunized with rat platelet by weekly injections. These mice develop a transient thrombocytopenia and anti-platelet auto antibodies are produced.
In the present work, we used this animal model to produce monoclonal anti bodies. These anti bodies were then submitted to a series of assays including western blot, ELISA, flow cytometry and clot retraction. Their thrombocytopenic effect was tested in vivo.
We first confirmed that the mice in this models do produce auto antibodies and that these anti bodies bind equally to rat and mouse platelets. We also showed that these auto bodies, which were all of the IgM isotype, possibly bind CD42b and CD41 in western blot.
We later showed that these anti bodies has different pathogenic effects both in vitro and in vivo. Two were found to inhibit platelet function in vitro and four lowered the platelet count in vivo. Finally, we showed that these anti bodies are more potent at binding activated platelets that resting platelets even though the reason for this is not clear

Autoantibodies --- Antibodies, Monoclonal --- Mice --- Thrombocytopenia --- Blood Platelets

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La toxine du choléra (CT) est un puissant immunogène du système immunitaire associé aux muqueuses (GALT). En effet, contrairement à bon nombre d’antigènes (AG) non réplicatifs, CT administrée per os déclenche une forte réponse en IgA sécrétoires (IgAs) anti-CT en plus d’une réponse en IGG anti-CT.
Nous avons étudié l’influence de CT sur la tolérance orale induite par l’ovalbumine (OVA). Des souris BALB/c sont immunisées per os avec une solution contenant 25 mg d’OVA et 10 μg de CT non couplées (groupe OVA + CT). Elles sont réimmunisées deux semaines plus tard, par voie parentérale, avec une solution contenant 100 μg d’OVA en présence d’adjuvant complet de FREUND (CFA). Ensuite, les sérums sont collectés quatre fois à une semaine d’intervalle et testés par ELISA pour leur titre en Ac de classe IgG, IgM et IgA. En plus des principales classes d’immunoglobulines (Ig), les titres en anticorps (Ac) de sous-classe IgG1, iGG2a et IgG2b sont évalués pour les sérums obtenus à la dernière saignée. Les résultats montrent que CT rompt la tolérance orale induite par l’ingestion per os d’une dose unique de 25 mg d’OVA. En effet, la réponse systématique en IgG anti-OVA est augmentée d’environ 2,5f fois pour le groupe OVA + CT. Les Ac igG anti-OVA produits sous l’influence de CT principalement de la sous-classe IgG1. CT semble diminuer la réponse en IgG2a. ces données obtenues in vivo sont en accord avec les travaux réalisés in vitro qui démontrent une action inhibitrice de CT sur les lymphocytes T-helper-1 (TH1) mai non sur les Th2. CTB, la sous-unité de fixation de la toxine cholérique, n’exerce pas d’effet immunoadjuvant vis-à-vis de l’OVA et ne rompt pas la tolérance orale.
les mécanismes précis de l’action cellulaire de CT ne sont pas clairement connus. S’il est certain que CT provoque une altération du système de régulation du GALR, il semblerait que l’action immunoadjuvante de CT soit aussi associée à une augmentation de la perméabilité intestinale. Nous avons étudié ce dernier paramètre pour l’OVA. Des souris BALB/c reçoivent une dose orale de 40 mg d’OVA (groupe OVA) seule ou en association avec 10 μg de CT (groupe OVA + CT) ou 10 μg de CTB (groupe OVA +CTB). La cinétique de la réabsorption intestinale d’OVA est quantifiée, pour chaque groupe, par le dosage par ELISA de l’OVA présente dans les sérums prélevés à différents temps après l’ingestion. Les souris du groupe OVA + CT ont une concentration d’OVA réabsorbée 3 à 8 fois supérieure à celle des autres groupes. L’immunisation orale préalable contre CT (3 ingestions orales de 10 μg de CT à une semaine d’intervalle) des souris du groupe OVA + CT supprime cette augmentation de la perméabilité à l’OVA induite par CT.

Cholera Toxin --- Vaccination --- Ovalbumin --- Immune Tolerance --- Medical Laboratory Science