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UCLouvain (3)


Resource type

book (3)


Language

French (3)


Year
From To Submit

1996 (2)

1992 (1)

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Book
Influence du fructose sur la viabilité de tranches de foie de rat soumises à un processus d'hypoxie-réoxygénation : étude biochimique et morphologique

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Abstract

Le but de ce travail consiste en la mise au point et la validation du modèle des tranches de foie dans l’étude de la lésion d’hypoxie-réoxygénation. Dans le cadre de cette étude nous évaluons l’effet protecteur du fructose lors d’un stress oxydatif induit expérimentalement, soit par hypoxie-réoxygénation, soit par l’hyperoxyde de tert-butyle.
Nous avons envisagés divers paramètres tels que les taux d’ATP et de glycogène intracellulaires, comme critères métaboliques, et la libération de lactate-déshydrogénase (LDH), signe d’altérations membranaires, comme critère de viabilité cellulaire.
les conditions d’hypoxie sont réalisée par saturation des milieux d’incubation avec un mélange gazeux N2/CO2 (95% - 5%) et le stress oxydatif est induit expérimentalement dans les tranches de foie par addition d’hydroperoxyde de ter-butyle lors de la réoxygénation normothermique.
Alors que les effets délétères de la réoxygénation sur l’intégrité des tranches de foie soumises préalablement ç une hypoxie ne purent significativement être mis en évidence, l’effet protecteur du fructose lors de l’hypoxie et de la réoxygénation fut lui bel et bien établi, validant ainsi la technique des tranches de foies pour l’étude de ce lésions


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Implications énergétiques de l'activation de la poly(ADP-ribose) polymérase suite aux dommages de l'ADN par l'hydroperoxyde de tert-butyle

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Abstract

Le stress oxydatif, caractérisé par un profond déséquilibre oxydoréducteur de la cellule, conduit à la formation de composés capables de réagir avec les macromolécules cellulaires. Pour faire face à l’atteinte oxydative, les cellules disposent de systèmes de défense, chargés d’éliminer les espèces oxydantes, et de systèmes de réparation qui interviennent lorsque les lésions se sont déjà produites.
L’ADN est une cible des agents oxydants. Ceux-ci peuvent induire des cassures de brins ou/et des sites labiles en milieu alcalin. Nous avons mis en évidence par la technique de l’élétrophorèse en gel d’agarose que l’agent inducteur de stress oxydatif utilisé dans nos expériences, l’hydroperoxyde de tert-butyle, n’induit pas de fragmentation de l’ADN des hépatocytes isolés. Les cassures que nous avons observées par la technique de FADU (Fluorimetric Analysis of DNA Unwinding) sont donc de types simple brin.
La poly(ADP-ribose) polymérase, enzyme nucléaire, reconnait les cassures de brins et est activée par celles-ci. Elle catalyse alors le transfert d’unité (ADP-ribose) depuis le NAD+ sur elle-même et sur d’autres protéines nucléaires.
Lorsque les lésions à l’ADN sont trop importantes, le contenu intracellulaire en NAD+ diminue suite à sa consommation par la poly(ADP-ribose) polymérase activée. C’est effectivement ce que nous avons observé lorsque des hépatocytes isolés de rat sont incubés en présence d’un inducteur expérimental du stress oxydatif : l’hyperperoxyde de tert-butyle.
Néanmoins, cette diminution du taux en NAD+ n’est pas responsable de la perte en ATP ni de la lyse cellulaire observées dans ces mêmes conditions. La cytotoxicité du peroxyde n’est don c pas expliqué par la voie d’activation de la poly(ADP-ribose) polymérase suite à) des cassures de brins de l’ADN


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Optimalisation d'un modèle de tranches de rein pour des études de nephrotoxicité

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Abstract

Notre étude sur tranches de rein a permis de montrer que lorsque celles-ci étaient incubées en l’absence de toxique, elles maintenaient leurs capacités fonctionnelles pendant les 6 heures d’incubation. De plus, l’intégrité histologique ne semble pas altérée au terme de l’incubation.
Ces observations ont été réalisées par mesure au cours du tems de différents paramètres de viabilité (libération par les tranches de rein d’enzymes intracellulaires : GGT, PAL ; NAG et LDH), et fonctionnels (capacité de synthèse protéique, transport actif de l’a-méthylglucose, teneur en ATP et en GSH). Une étude histologique à également été réalisée.
L’étude des effets induits par les sels de chrome hexavalent et trivalent, par le chlorure de mercure et par l’acide mercapturique de l’hexachlorobutadièbe, a permis de mettre en évidence de grandes différences de sensibilité entre ces divers paramètres, soulignant ainsi l’importance de prendre en considération un grand nombre de critères.
Nos résultats sont par ailleurs globalement en accord avec certaines observations faites dans d’autres études in vitro et in vivo.

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