Listing 1 - 10 of 10 |
Sort by
|
Choose an application
Choose an application
Choose an application
Choose an application
Choose an application
Choose an application
Conseil national des femmes (belgique) --- Archives --- Catalogues
Choose an application
Prime ministers --- Premiers ministres --- Belgium --- Belgique --- Politics and government --- Politique et gouvernement
Choose an application
Bacillus cereus is een sporenvormende pathogeen die alom vertegenwoordigd is in de natuur. Bepaalde B. cereus stammen produceren een emetisch toxine cereulide, een cyclisch dodecadepsipeptide dat zich voordoet als een K+ ionofoor, en dat het transmembranair potentiaal in de mitochondriën van cellen verstoort. Cereulide wordt voornamelijk teruggevonden in zetmeelhoudende voedingsproducten waar het vanaf 8 μg CER/kg lichaamsgewicht een acute voedselvergiftiging kan veroorzaken. Tevens bevinden zich in het voedsel ook subtoxische concentraties die niet meteen symptomen vertonen bij de consument, maar mogelijks wel op celniveau schade veroorzaken. De potentiële toxiciteit van herhaaldelijke blootstelling aan lage dosissen cereulide, kleiner dan 4 ng/ml, is nauwelijks gekend. In deze studie wordt de invloed van sub-acute dosissen op een lange termijn blootstelling op de intestinale mucosa en levercellen onderzocht. Hiervoor wordt gebruik gemaakt van de humane epitheel cellijn Caco-2 die model staat voor de intestinale barrière en een HepG2 cellijn om de metabolische processen van de lever te onderzoeken.Om de toxiciteitsgrens van cereulide te onderzoeken werden niet-gedifferentieerde Caco-2 en HepG2 cellen 3 dagen blootgesteld aan lage concentraties van cereulide. Vervolgens werden subtoxische concentraties gekozen om de cellen bloot te stellen voor 10 dagen, om zo het langdurig effect na te bootsen. Om de mitochondriale activiteit en de cellulaire proteïne inhoud van de cellen te bepalen werden toxiciteitsassays uitgevoerd, respectievelijk MTT en SRB. Daarnaast werd de XF Mito Stress Test Kit van Seahorse Bioscience gebruikt om het effect van cereulide op de mitochondriale functies en het zuurstofverbruik (OCR) te onderzoeken. De Caco-2 cellen bleken bij zowel de MTT als SRB reactie een toxiciteit te vertonen vanaf 0,1 nmol/L CER na 3 dagen blootstelling. Na 10 dagen vertoonde de SRB een toxische invloed vanaf 0,05 nmol/L in tegenstelling tot de mitochondriale activiteit en respiratie die pas verstoord werden vanaf 0,1 nmol/L CER. Ook de HepG2 cellen bleken gevoelig aan lage concentraties cereulide: bij MTT vanaf 0,5 nmol/L en bij de SRB vanaf 0,25 nmol/L na 3 dagen blootstelling. Er vonden morfologische veranderingen plaats vanaf 0,25 nmol/L en verstoringen in mitochondriale functies waren zichtbaar vanaf 0,5 nmol/L. Nadat de cellen 10 dagen werden blootgesteld vertoonden de MTT analyse en de Mito stress analyse een hepatotoxiciteit vanaf 0,25 nmol/L terwijl de SRB een toxisch effect aangaf vanaf 0,1 nmol/L CER. Deze resultaten wijzen erop dat lage dosissen cereulide zowel het intestinal als het leverepitheel kunnen beschadigen na een herhaalde blootstelling. Verder onderzoek naar de prevalentie en de invloed van sub(acute)-dosissen van cereulide en andere gelijkaardige toxines zoals beauvericine en enniatine B zou een interessante aanvulling van dit eindwerk kunnen betekenen.
Choose an application
Proteoomanalyse is de studie van het proteoom. Hierbij worden de structuur en functies van proteïnen onderzocht. Het proteoom is de verzameling van alle proteïnen die in een organisme tot expressie komen. In deze bachelorproef werden verschillende protocollen vergeleken voor de monstervoorbereiding van proteoomanalyses aan de hand van massaspectrometrie. Deze protocollen zijn door de jaren heen in gebruik genomen door de VIB Proteomics Core en verschillen in de lyse- en extractiemethode om de beoogde proteïnen uit biologisch materiaal te isoleren. De vergeleken protocollen lyseren cellen op basis van chaotropen zoals ureum en guanidinium hydrochloride, detergenten zoals CHAPS en Amphipols, vriesdooi cylci of op basis van een commerciële kit van de firma PreOmics. Elk van deze protocollen werd gebruikt voor een proteoomanalyse van humane HEK 293T cellen. Bij elk lyseprotocol werd geëvalueerd hoeveel proteïnen geïdentificeerd werden, van welke cellulaire compartimenten deze proteïnen afkomstig waren en wat de aanwezigheid was van gewenste, toegelaten en ongewenste eiwitmodificaties. Ook de efficiëntie van eiwitverknipping tijdens de monstervoorbereiding door de proteolytische enzymen endoLysC en trypsine werd geëvalueerd aan de hand van het aantal missed cleavages die werden teruggevonden in de geïdentificeerde peptiden. Ondanks kleine verschillen tussen de protocollen vertoonden alle procedures verwachtte aantallen gewenste, aanvaarde en ongewenste eiwitmodificaties, met als noemenswaardige uitschieters een hoog percentage aan geoxideerde methionineresiduen in het PreOmics protocol en een hoog percentage aan eiwitcarbamylatie in het Ureum protocol. Eiwitverknipping door endoLysC en trypsine verliep efficiënt bij protocollen die gebruik maken van detergenten en vries-dooi cycli. Het standaardprotocol op basis van ureum behaalde hogere, maar nog steeds aanvaardbare percentages aan missed cleavages, in tegenstelling tot het protocol op basis van guanidinium hydrochloride waarbij slechts de helft van de peptiden geen missed cleavages bevatten. Doordat guanidinium hydrochloride een inert chaotroop is, en daarom ongevoelig voor schommelende reactiecondities, werd het veelbelovende guanidinium hydrochloride protocol verder geoptimaliseerd en versneld naar analogie met de commerciële PreOmics procedure. Tijdens een eerste optimalisatie-experiment werd een single pot extractie-, reductie- en alkylatieprocedure succesvol ontwikkeld. In een tweede optimalisatie-experiment werd volledige endoLysC verknipping bereikt in slechts 30 minuten door een verhoging van de enzymconcentratie bij een optimale temperatuur. Gelijkaardige optimale condities voor snelle verknipping door trypsine konden niet worden achterhaald en vormen het onderwerp van verder onderzoek aan de VIB Proteomics Core met als doel om de volledige monstervoorbereidingsprocedure verder in te korten tot een procedure van een 4 à 5 uur.
Choose an application
Bruges (Belgium) --- Flanders --- Bruges (Belgique) --- Flandre --- Religious life and customs. --- Church history --- Vie religieuse --- Histoire religieuse --- 949.33 BRUGGE --- 949.33 BRUGGE Geschiedenis van België: graafschap Vlaanderen; provincie West-Vlaanderen--(reg./lok.)--BRUGGE --- Geschiedenis van België: graafschap Vlaanderen; provincie West-Vlaanderen--(reg./lok.)--BRUGGE --- Brugge (Belgium) --- Brujas (Belgium) --- Bri︠u︡gge (Belgium) --- Bruga (Belgium) --- Brucke Villa (Belgium) --- Brudgias (Belgium) --- Brugae Flandrorum (Belgium) --- Brugiae (Belgium) --- Brugias (Belgium) --- Brugis (Belgium) --- Flandrense Municipium (Belgium) --- Geschiedenis van België: graafschap Vlaanderen; provincie West-Vlaanderen--(reg/lok)--BRUGGE. --- -Bruges (Beligum) --- -Flanders --- -Religious life and customs. --- Church history -. --- History of Belgium and Luxembourg --- anno 1500-1599 --- Bruges --- Histoire --- Brugge --- Geschiedenis van België: graafschap Vlaanderen; provincie West-Vlaanderen--(reg./lok.)--BRUGGE. --- Plaatselijke geschiedenis --- West-Vlaanderen
Listing 1 - 10 of 10 |
Sort by
|