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Gene MAGE-A1 belongs to a family of 12 genes that are expressed in alarge number of tumors but silent in health tissues except in male germ-line cells. These genes encode antigens recognized by cytolytics T cells, which are presently used for cancer immunotherapy. However, the function of the MAGE proteins is still largely despite numerous studies published recently.
In this work, with the goal to discover some post-translational modifications, we first tried to characterize by different techniques the molecular mass of the MAGE-A1 protein which migrate in a polyacrylamide gel of a 46 kDa protein while a molecular mass of 34 kDa was predicted on the basis of its amino-acid sequence. Unfortunately, we were not able to determine the molecular mass of MAGE-A1 probably because this protein is prone to aggregate. Today, this question is unresolved.
Then, on the basis of data obtained by Sandra Laduron (Ludwig institute) we tried to confirm with the yeast two hybrids system the interaction observed in vitro between MAGE-A1 and HDAC1 proteins. We couldn’t reproduce this interaction maybe due to a conformational change in the fusion proteins. Using the same technique, we were also unable to identify an interaction between HDAC1 and MAGE-A4, a protein highly similar to MAGE-A1. Following the work of S. Laduron, we assumed that MAGE-A1 could play a role in the signal transduction pathway of Notch1, maybe by binding the CBF1 transcription factor. Using the yeast two hybrids system, we could not demonstrate an interaction between MAGE-A1 and CBF1 proteins, suggesting that MAGE-A1 is not implicated in the signalization pathway of Notch1.
Finally, on the basis of the work of S. Laduron which showed that Skip binds to MAGE-A1 protein, we showed that this interaction is mediated by the SNW domain of the Skip protein, a conserved domain used by Skip to interact with other proteins such as Ski, Rb, the vitamin D receptor, Smad 2 and Samd 3 Le gène MAGE-1 appartient à une famille de 12 gènes qui sont exprimés dans un grand nombre de tumeurs mais qui restent silencieux dans les tissus sains sauf dans les cellules germinales mâles. Ces gènes codent des antigènes qui peuvent qui peuvent être reconnus par les lymphocytes T cytolytiques, d’où l’intérêt qu’on leur porte en immunothérapie anti-tumorale. Cependant la fonction des protéines MAGE reste un grand mystère malgré les nombreux travaux réalisés ces dernières années à ce sujet.
Au cours de ce mémoire, dans le but de découvrir d’éventuelles modifications post-traductionnelles, nous avons d’abord tenté de caractériser par différentes techniques la masse moléculaire de la protéine de 46 Kda alors que cette protéine devrait, sur base de sa séquence en acides aminés, avoir une masse moléculaire de la protéine MAME-A1 purifiée, sans doute parce que la protéine s’agrège. A ce jour, la question est toujours en suspens.
Ensuite, suite aux travaux de Sandra Laduron à l’Institut Ludwig à Bruxelles, nous avons voulu vérifier dans un système deux hybrides dans la levure l’interaction observée précédemment in vitro entre les protéines MAGE-A1 et la protéine HDAC1. Nous ne sommes pas parvenus à reproduire cette interaction, peut-être à cause d’un changement conformationnel des protéines de fusion. Par la même technique, nous n’avons pas non plus mis en évidence une interaction entre HDAC1 et MAGE-A4, une protéine très semblable à MAGE-A1. Au cours des travaux de S. Laduron, l’hypothèse a été émise que MAGE-A1 interviendrait dans la voie de transduction du signal de Notch1 en liant le facteur de transcription CBF1. Nous avons montré dans un système deux hybrides dans la levure qu’il n’ya pas d’interaction entre la protéine MAGE-A1 ET CBF1, ce qui suggère que MAGE-A1 ne serait pas impliqué dans la voie de signalisation de Notch1.
Enfin, sur base des travaux de S. Laduron qui montrent que Skip lie la protéine MAGE-A1, nous avons déterminé par immunoprécipitation de protéines skip tronquées que cette interaction se produit au niveau du domaine SNW de la protéine Skip, domaine principal d’interaction de la protéine Skip avec Ski, Rb, le récepteur de la vtamine D, Smad 2 et Samd 3

Histones --- Protein Interaction Mapping