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Some T lymphocytes were described as CD8-independent, because they can be activated without the CD8 co-receptor cross-linking with the HLA class I molecules. We isolated CD8-independent CTL clones to study the ability of these CTL to bind a tetramer either at rest or after stimulation. A mutated tetramer carrying two mutations in the 3 domain of the HLA molecules at the contact site with CD8, was used to isolate a CD8-independent anti-MelanA CTL clone. By screening the laboratory's collection of CTL, an anti-MAGE10 clone was also identified as being CD8-independent. At rest, these two clones can bind to both mutated and non-mutated tetramer and the intensity of staining is similar in presence or absence of a blocking anti-CD8 antibody. Previous research in the laboratory indicated that the majority of recently stimulated CD8 T lymphocytes have a reduced capacity to bind to tetramers and to produce cytokines. The suggested explanation is that the TCR and CD8 molecules are not colocalized on the cell surface of these dysfunctional T cells. The CD8-independent CTL clones were used to validate this hypothesis. We studied the staining with a mutated or a non mutated tetramer and tested the production of cytokines from rested or recently stimulated CTL. Staining with the non-mutated tetramer decreased slightly on day 4 compared to day 0 (before stimulation). The production of cytokines remained unchanged. We conclude that the absence of proximity of the TCR and CD8 molecules may be the main explanation for the dysfunction of recently stimulated T cells. The use of FRET (fluorescence resonance energy transfer) technique allows to estimate the proximity between TCR and CD8 molecules and is thus an appropriate technique to identify some anergic T cells in various types of diseases such as cancer or chronic viral diseases. Certains lymphocytes T ont été décrits comme CD8-indépendants parce qu'ils ne nécessitent pas de liaison du co-récepteur CD8 au HLA pour être activés. Nous avons isolé des CTL CD8-indépendants pour étudier leur capacité à se lier à un tétramère, au repos et après stimulation. Un tétramère, doublement muté au site de liaison avec le CD8 dans le domaine 3 du HLA, a été utilisé pour isoler un clone anti-MelanA CD8-indépendant. En criblant la collection de CTL du laboratoire, un clone anti-MAGE10 a aussi été identifié comme étant CD8-indépendant. Au repos, ces deux clones sont marqués par un tétramère non muté et aussi par un tétramère muté. Leur intensité de marquage est similaire en présence ou non d'un anticorps anti-CD8 bloquant. Des travaux au laboratoire ont montré que la plupart des lymphocytes T CD8, dans les jours qui suivent une stimulation, ont une capacité réduite à être marqués par un tétramère et à produire des cytokines. L'explication proposée est que les molécules TCR et CD8 ne sont pas colocalisées à la surface cellulaire de ces lymphocytes T dysfonctionnels. Nos clones CD8-indépendants ont été utilisés pour valider ou infirmer cette hypothèse. Nous avons étudié la capacité de marquage par un tétramère non muté et la production de cytokines des deux clones avant et après stimulation. Comparé à des CTL au repos (jour 0), le marquage par un tétramère non muté ne diminue que faiblement au jour 4 après stimulation et la production de cytokines reste similaire. Nous en concluons que l'absence de proximité des molécules TCR et CD8 serait la cause principale de non fonctionnalité des lymphocytes dans les jours qui suivent une stimulation. L'utilisation du FRET (fluorescence resonance energy transfer) permet d'estimer la proximité entre le TCR et le CD8. Le FRET serait donc une technique adéquate pour identifier des lymphocytes T anergiques dans différents types de maladies telles que cancers ou maladies virales chroniques.

T-Lymphocytes --- CD8-Positive T-Lymphocytes --- Major Histocompatibility Complex --- Genes, MHC Class I --- Genes, MHC Class II