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Issue d'une collaboration de recherche entre l'unité de Chimie Analytique de Gembloux Agro-Bio Tech de l'Université de Liège (ULg) et l'unité de Chimie Pharmaceutique Organique de la Faculté de Pharmacie de l'Université Libre de Bruxelles (ULB), ce travail de fin d'études avait pour objectif principal de vérifier la présence ou non des métabolites secondaires de moisissures d'Alternaria et plus particulièrement ceux qui sont antagonistes du métabolisme des sphingolipides tels que les fumonisines, les toxines AAL et l'australifungine dans des échantillons de céréale contaminés par des moisissures par chromatographique liquide couplée à la spectrométrie de masse à haute résolution et en tandem (LC-HRMS(/MS)). L'autre objectif de ce travail visait une recherche plus exhaustive des constituants extraits des échantillons avec des outils chimiométriques LC-MS/MS. Une approche métabolique qui permettrait de discriminer les échantillons et rechercher les métabolites qui font la différence entre échantillons. Pour ce faire, nous avons débuté par une optimisation de la méthode de séparation chromatographique des extraits bruts de farine. L'introduction d'un clean-up SPE a également été envisagée dans l'optique d'une amélioration « sélective » des profils chromatographiques. Dans un second temps, nous avons procédé à une analyse ciblée à m/z 409,2585 ± 0,1 [M+H]+ de l'autralifungine dans les extraits bruts en comparant les paramètres analytiques (tR et spectre de MS) des pics des échantillons avec ceux du standard d'australifungine. Par contre, la recherche des mycotoxines (fumonisines, toxines AAL et autres) a été réalisée sur les extraits purifiés en LC-MS dans une base de données spécifique de mycotoxines d'Agilent Technologies. Enfin, dans un troisième temps, nous avons appliqué une approche métabolomique à des extraits bruts et purifiés. Le traitement des données a été réalisé par la plateforme « workflow4metabolomics » et les empreintes métaboliques obtenues des différents groupes d'échantillons ont été comparées entre-elles. L'évaluation de l'effet de la purification « clean-up » SPE des extraits bruts a également été réalisée.

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This work is the result of a research collaboration between the laboratory of Analytical Chemistry of Gembloux Agro-Bio Tech of l’Université de Liège (ULg) and the laboratory of Organic Pharmaceutical Chemistry of the Faculty of Pharmacy of l’Université Libre de Bruxelles (ULB). The main objective of this Master thesis was to verify the presence or absence of secondary metabolites of Alternaria fungus and more particularly those which are antagonistic to the metabolism of sphingolipids such as fumonisins, AAL toxins and australifungin in cereal samples contaminated with fungi using liquid chromatography coupled with mass spectrometry (LC-MS). The other objective of this work consisted of a more exhaustive search of the constituents extracted from the samples via LC-MS/MS chemometric tools. A metabolic approach was applied to be able to discriminate samples and look for metabolites that differentiate samples from each other. To do this, we started by an optimization of the chromatographic separations method on raw flour extracts. The introduction of an SPE clean-up was also done with a view to a "selective" improvement of the chromatographic profiles. The next step consisted in analyzing australifungin at m/z 409.2585 ± 0.1 [M + H]+ in the raw extracts. Analytical parameters (tR and MS spectrum) obtained from each samples were compared with those of the australifungin standard. On the other hand, the screening for mycotoxins (fumonisins, AAL toxins and others) in the raw and purified extracts was done in a mycotoxin specific database from Agilent Technologies. Finally, the last step of this work was dedicated to the metabolomic approach from raw and purified extracts. Data processing was carried out using the platform « workflow4metabolomics » and the metabolic fingerprints obtained from the different groups of samples were compared to each other. The effect of the SPE clean-up from raw extracts was also investigated. Issue d’une collaboration de recherche entre l’unité de Chimie Analytique de Gembloux Agro-Bio Tech de l’Université de Liège (ULg) et l’unité de Chimie Pharmaceutique Organique de la Faculté de Pharmacie de l’Université Libre de Bruxelles (ULB), ce travail de fin d’études avait pour objectif principal de vérifier la présence ou non des métabolites secondaires de moisissures d’Alternaria et plus particulièrement ceux qui sont antagonistes du métabolisme des sphingolipides tels que les fumonisines, les toxines AAL et l’australifungine dans des échantillons de céréale contaminés par des moisissures par chromatographique liquide couplée à la spectrométrie de masse à haute résolution et en tandem (LC-HRMS(/MS)). L’autre objectif de ce travail visait une recherche plus exhaustive des constituants extraits des échantillons avec des outils chimiométriques LC-MS/MS. Une approche métabolique qui permettrait de discriminer les échantillons et rechercher les métabolites qui font la différence entre échantillons. Pour ce faire, nous avons débuté par une optimisation de la méthode de séparation chromatographique des extraits bruts de farine. L’introduction d’un clean-up SPE a également été envisagée dans l’optique d’une amélioration « sélective » des profils chromatographiques. Dans un second temps, nous avons procédé à une analyse ciblée à m/z 409,2585 ± 0,1 [M+H]+ de l’autralifungine dans les extraits bruts en comparant les paramètres analytiques (tR et spectre de MS) des pics des échantillons avec ceux du standard d’australifungine. Par contre, la recherche des mycotoxines (fumonisines, toxines AAL et autres) a été réalisée sur les extraits purifiés en LC-MS dans une base de données spécifique de mycotoxines d’Agilent Technologies. Enfin, dans un troisième temps, nous avons appliqué une approche métabolomique à des extraits bruts et purifiés. Le traitement des données a été réalisé par la plateforme « workflow4metabolomics » et les empreintes métaboliques obtenues des différents groupes d’échantillons ont été comparées entre-elles. L’évaluation de l’effet de la purification « clean-up » SPE des extraits bruts a également été réalisée.

Mycotoxins – Alternaria Secondary Metabolites – Australifungin – Fumonisins – AAL toxins – Sphingolipids - Metabolomics – Liquid Chromatography / High Resolution Mass Spectrometry – SPE clean-up --- Mycotoxines - Métabolites secondaires d’Alternaria - Australifungine - Fumonisines - Toxines AAL - Sphingolipides - Métabolomique - Chromatographique liquide couplée à la spectrométrie de masse à haute résolution et en tandem – Clean-up SPE --- Sciences du vivant > Agriculture & agronomie