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Ce travail s’inscrit dans le cadre du développement d’un protocole de thérapie génique de tumeurs cérébrales expérimentales chez le rat, basée sur le transfert adénoviral du gène suicide de la thymidine kinase du virus Herpes simplex. Afin d’étudier la toxicité de cette approche thérapeutique au niveau du tissu cérébral sain environnant la tumeur, la gène suicide a été transféré in vitro dans différentes cultures de cellules cérébrales de rat.
Trois types de culture ont été mises au point et caractérisées : les cultures astrocytaires pures, neuronales pures et les cultures mixtes.
Afin d’évaluer la capacité d’infecter et de transférer un gène étranger dans les astrocytes et les neurones, les différentes cultures ont été infectées par un adénovirus porteur du gène lac Z d’Escherichia coli codant la β-galactosidase (AdRSVβgal). La révélation histochimique de la β-galactosidase et les marquages immunocytochimiques permettent d’identifier les cellules infectées in vitro par AdRSVβgal. L’adénovirus transfère efficacement le gène de la β-galactosidase dans un grand nombre d’astrocytes (cellules mitotiques) ou de neurones (cellules quiescentes). Cependant, l’efficience d’infection est toujours plus élevée pour les astrocytes que pour les neurones.
Le gène de la thymidine kinase du virus Herpes simplex (HSVtk) a ensuite été utilisé comme gène suicide, et a été transféré dans les cellules en culture par l’adénovirus recombinant AdRSVtk. La protéine HSVtk confère aux cellules qui l’expriment une sensibilité au traitement par des analogues de nucléosides tels que le ganciclovir. In vitro, le test de cytotoxicité MTT ainsi que les marquages immunocytochimiques révèlent une forte toxicité du ganciclovir pour les astrocytes infectés par AdRSVtk, par rapport à celle observée sur les neurones infectés par le même adénovirus. Il suffit qu’un très faible pourcentage des astrocytes soit infectés par AdRSVtk pour observer une toxicité du ganciclovir sur l’ensemble de la culture astrocytaire.

Herpes Simplex --- Thymidine Kinase --- Gene Transfer --- Cell Culture Techniques --- Ganciclovir --- Medical Laboratory Science