Choose an application

• Reference Manager
• EndNote
• RefWorks (Direct export to RefWorks)

Choose an application

• Reference Manager
• EndNote
• RefWorks (Direct export to RefWorks)

Choose an application

• Reference Manager
• EndNote
• RefWorks (Direct export to RefWorks)

Choose an application

• Reference Manager
• EndNote
• RefWorks (Direct export to RefWorks)

Voedingsmiddelen die behalve hun voedingswaarde bovendien ook voordelen hebben voor de gezondheid van de mens (functionele voeding), winnen de laatste jaren sterk aan populariteit. Probiotica zijn levende micro-organismen die een gezondheidsbevorderend effect hebben wanneer ze in voldoende hoeveelheden worden toegediend. Het heilzame effect van probiotica kan alleen gegarandeerd worden indien de bacteriën in staat zijn om zowel het productieproces van de voedingsmiddelen waarvan ze deel uitmaken, als de passage doorheen het gastro-intestinaal stelsel te overleven. Probiotische micro-organismen worden al toegepast in gefermenteerde melk- en yoghurtproducten, maar naast de zuivelindustrie wordt ook onderzoek verricht naar toepassing van probiotica in andere voedingsmiddelen zoals gefermenteerde worstwaren. In het huidige onderzoek werd beslist om droge gefermenteerde worstwaren te produceren waar zowel startercultuur SA-306 (bevat Lactobacillus sakei, Staphylococcus carnosus en Staphylococcus xylosus), als probiotica aan werden toegevoegd in gelijke hoeveelheden. De volgende probiotische culturen werden gebruikt: Lyofast BGP 93 (bevat Lactobacillus casei LC-01) en Lactobacillus paracasei LTH 2579. In een eerste fase van het onderzoek werden PCR’s, zowel in simplex als in multiplex toepassing, geoptimaliseerd om een snelle en accurate DNA-identificatie van Lactobacillus species mogelijk te maken. Aan de hand van de geoptimaliseerde PCR’s kon dan DNA-identificatie gebeuren van Lactobacillus sakei uit de startercultuur of van de probiotische micro-organismen (L. casei of L. paracasei LTH 2579) in alle stadia van het productieproces van droge gefermenteerde worstwaren. De verschillende multiplex PCR’s op geëxtraheerd DNA werden ook vergeleken met de multiplex kolonie PCR’s. Omdat bij kolonie PCR gebruik wordt gemaakt van intacte bacteriële cellen als template DNA en dus geen geëxtraheerd DNA nodig is, kan kolonie PCR aanzienlijke tijdwinst betekenen indien het aanwezige bacterieel DNA beschikbaar is voor amplificatie. In een tweede fase van het onderzoek werden verschillende methoden voor DNA-extractie geëvalueerd. Bij de eerste methode werd het bacterieel DNA vrijgesteld door middel van enzymatische lyse van de bacteriële celwand, bij de tweede methode gebeurde vrijstelling van het DNA door mechanische disruptie van de celwand zonder bijkomende zuivering en bij een derde methode werd het uitvoerig opgezuiverde DNA geprecipiteerd met isopropanol. Bij al deze methoden werd DNA geëxtraheerd dat bruikbaar was voor PCR.