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Le but de ce travail consistait à déterminer s’il existait des similarités au niveau génomique, entre de nouvelles particules virales dénommées « X », découvertes dans des cultures cellulaires infectées par le HIV et des sondes provenant de clonage de rétrovirus appartenant à des groupes différents. Ces comparaisons ont été expérimentalement réalisées par des expériences d’hybridation entre les clones marqués radioactivement et des ARN extraits à partir de cultures cellulaires du « X ».
On a pu observer des résultats positifs avec eux de ces clones : le Feline Leukemia virus (FeLV) qui est un rétrovirus responsable d’immunodéficience chez le chat et le Radiation Leukemia virus (RAD LV) qui est un virus leucémique à tropisme thymique dans des cellules de souris soumises à des radiations ionisantes.
Nous avons alors fractionné ces deux clones en fragments qui ont à leur tour, été hybridés avec de l’ARN de « X » afin de préciser quelles étaient les fractions de ces clones qui présentaient des similitudes avec le nouveau génome.
ces expériences nous ont permis de conclure à une origine rétrovirale des particules virales « X » et de confirmer l’appartenance des virus « X » au groupe « MLV related virus » dont font aussi partie les 2 clones précédemment décrits.
Des expériences d’hybridation entre les deux clones ont également confirmé des homologies entre certaines de leurs portions génomiques.
Nous avons également hybridé les mêmes fragments chez les 2 clones avec des sondes d’ADNc issues de l’amplification d’ARN purifiés à partir de cultures cellulaires du « X ».
L’observation d’une hybridation entre l’une de ces sondes d’ADNc et certains fragments des clones et la comparaison des séquences de ces hybrides ont apporté la confirmation de l’origine rétrovirale de cet ADNc, et la détermination de sa séquence qui correspond à une région du « LTR » (Long Terminal Repeat : séquence caractéristiques des rétrovirus et présente aux 2 extrémités du génome).

Retroviridae --- Nucleic Acid Hybridization --- In situ Hybridization --- Medical Laboratory Science

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Deux méthodes sont utilisées pour la quantification des anticorps dirigés contre le VIH dans les tests d’Elisa et d’immunoempreinte. La première donne une estimation de la présence d’anticorps par lecture de l’absorbance au spectrophotomètre pour l’Elisa et au densitomètre pour le Western Blot. La seconde méthode consiste à quantifier exactement la proportion d’immunoglobulines qui se fixent au support solide des tests par comptage radioactif et de déduire l’attachement spécifique des anticorps.
La lecture en absorbance des différents tests montre toujours une saturation pour les dilutions d’immunoglobulines choisies. La zone de linéarité de réponse dans laquelle l’absorbance varie en fonction de la quantité d’immunoglobulines anticorps fixés peut être calculée par comptages radioactifs. Cette « fenêtre » est très étroite pour les tests Elisa Abbott et Behring (0.6 et 1.8 ng), un peu plus large pour Organon (6.9 ng) et impossible à déterminer pour Wellcome et l’Elisa « maison ». La quantification des Elisa par la mesure de l’absorbance est donc difficile. L’immunotransfert, par contre, montre une zone de linéarité de réponse beaucoup plus large permettant la quantification au densitomètre jusqu’à 330 ng d’immunoglobulines anticorps fixés sur la bande de nitrocellulose.
La méthode radioactive, c’est-à-dire l’estimation de la proportion d’anticorps fixé en fonction de la quantité totale d’immunoglobulines, montre une zone de linéarité plus longue pour Abbott (3 à 5 ng) et Behring (11 à 42 ng) et ne donne pas de signe de saturation dans les dilutions choisies pour Organon et l’immunotransfert.
La sensibilité des différents tests peut être estimée par la plus eptite quantité d’anticorps fixée qui donne encore un résultat positif. Pour l’ensemble des 2lisa étudiés, le type indirect (Abboott HIV 1, HIV 1+2 ; Berhing HIV 1+2 et Organon) apparaît plus sensible que le test par compétition (Berhing HIV 1, Wellcome et l’Elisa « maison ») ; le premier type détecte des quantités d’anticorps de l’ordre du dixième de ng alors que le second type d’Elisa donne un résultat positif à partir du minimum 4 ng.
Si on admet que la limite de visibilité d’une bande spécifique sur la nitrocellulose constitue la sensibilité de l’immunotransfert ; alors que celui-ci est certainement le test le plus sensible (la limite de visibilité à l’œil nu est de 0.04ng). L’Elisa peut donc donner un résultat faussement négatif alors que l’immunotransfert montre une bande colorée (33).
La spécificité des tests peut également être discuter ; nous l’apprécions en quantifiant l’attachement dit non spécifique par rapport au spécifique. Sans conteste, l’immunotransfert est le test le plus spécifique. En Elisa, la fixation non spécifique « affinité zéro, capacité maximum » est particulièrement élevée pour deux tests par compétition (Wellcome et Elisa « maison ») ; néanmoins, cet attachement non spécifique ne semble pas influencer la quantification par spectrophotométrie.
Parmi les tests de détection des anticorps dirigés contre le VIH, le plus sensible et le plus spécifique est l’immonuempreinte. Il offre, en plus, l’avantage de pouvoir estimer la proportion d’anticorps dirigés contre les différentes protéines virales. La quantification par densitométrie n’est réalisable qu’en dessous du plateau de saturation. Une estimation précise de la quantité d’anticorps par densitométrie serait possible par l’emploi d’une standardisation interne.
La quantification par comptages radioactifs est beaucoup plus précise et permet d’estimer la proportion exacte d’anticorps fixés. Il est maintenant accepté qu’il y a une corrélation entre l’état de santé du patient et la perte ou la persistance de certains anticorps. Il serait intéressant pour le clinicien de connaître de façon précise les quantités d’anticorps qui interviennent dans els tests ; pour cela, la méthode radioactive serait bienvenue mais son utilisation en clinique nécessiterait que les immunoglobulines de chaque patient soient purifiées, quantifiées et iodées

Immunologic Tests --- HIV Antibodies --- Diagnosis, Laboratory --- Medical Laboratory Science