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Hepatocyte nuclear factor six (HNF-6) is the prototype of the sixth family of liver-enriched transcription factors, called the ONECUT family. In mammals, this family contains three members, HNF-6 (OC-1), OC-2 and OC-3, which have been discovered in the host laboratory.
An alignment of the sequences of mammalian ONECUT proteins led to the identification of conserved regions among ONECUT proteins. The aim of this work was to study the role of one of these regions, the MRDER box. Two strategies have been used. First, we have performed a comparative study of the DNA-binding and the transcriptional activation properties of HFN-6α and of a mutant of HNF-6α whose MRDER bow has been deleted (HFN-6α∆MRDER). Our results show that this conserved box is involved in the transcriptional activation by HFN-6α without affecting the DNA-binding properties. Secondly, we have investigated whether the MRDER box can stimulate transcription when it is fused to a heterologous DNA-binding domain. We have studied the transcriptional activation properties of a fusion protein, GAL4-MRDER, composed of the yeast GAN4 DNA-binding domain fused to the MDER box. Our data show that the MRDER box is unable to stimulate transcription when it is isolated from its natural context in the HNF-6α protein.
In the last part of this work, we have performed a search for sequences homologous to the HNF-6α MRDER box. This analysis demonstrates that the MRDER box is specific to vertebrate ONECUT proteins. Indeed, the MRDER box is present in the three mammalian ONECUT members and in the zebrafish ONECUT homologue (Danio rerio), but not in the ONECUT proteins of invertebrates La protéine HNF-6 est le prototype de la sixième famille de facteurs de transcription hépato-spécifiques, la famille ONECUT. Chez les mammifères, celle-ci est composée de trois membres, HNF-6 (OC-1), OC-2 et OC-3. les trois membres de la famille ONECUT ont été découverts au sein du laboratoire d’accueil et y sont actuellement en cours d’étude.
Un alignement de séquences peptidiques des facteurs ONECUT de mammifères à permis de mettre en évidence la présence de régions conservées entre les protéines ONECUT. Cet alignement des protéines ONECUT de mammifères fut le point de départ du présent mémoire dont l’objectif est l’étude d’une région conservée, la boîte MRDER. Pour mener à bien ce projet, deux stratégies ont été employées. Premièrement, nous avons comparé la liaison à l’ADN et l’activité transcriptionnelle de HNF-6α et d’une protéine HNF-6α dont la boîte MRDER a été délétée. Les résultats ont montré que cette boîte conservée participe à l’activation de la transcription sans affecter la liaison à l’ADN. Deuxièmement, nous avons étudié les propriétés transcriptionnelle de la boîte MRDER isolée de son contexte naturel. Nous avons mesuré l’activité d’une protéine de fusion, GAL4-MRDER, composée du domaine de liaison à l’ADN de le protéine de levure GAL4 fusionné à la boîte MRDER. Cette dernière ne montra aucune activité transcriptionnelle lorsqu’elle était isolée de son contexte naturel.
La dernière partie de ce travail décrit les résultats obtenus lors d’une recherche d’homologie de séquences à partir de la séquence peptidique de la boîte MRDER. Cette recherche a confirmé les résultats de l’alignement et a permis de caractériser la boîte MRDER. Cette recherche a confirmé les résultats de l’alignement et a permis de caractériser la boîte MRDER comme une spécificité des protéines ONECUT de vertébrés. En effet, mis à part les trois membres de la famille ONECUT de mammifères, cette région est présente dans l’homologue ONECUT du poisson-zèbre (Danio rerio), mais pas dans les protéines ONECUT des invertébrés

Hepatocyte Growth Factor