Abstract | Keywords | Export | Availability | Bookmark

Choose an application

• Reference Manager
• EndNote
• RefWorks (Direct export to RefWorks)

The Amyloid Precursor Protein (APP), which plays a central role in Alzheimer’s disease, is a widely expressed cell-surface protein whose normal biological function is poorly understood. The endoproteolytic cleavages of APP, controlled by alpha-, beta- and gamma- secretase activities, lead to the production of soluble APP and amyloid beta-peptide (Aβ). The γ-cleavage is also thought to be responsible for the release of an intracellular C-terminal fragment, named APP intracellular domain (AICD), that is involved in intracellular signalling. Fe65 is an adaptator protein that was reported to interact with AICD, but the role of Fe65 In the processing of APP and the AICD-dependent signalling remain unclear. The aim of our work was to analyze the mechanisms leading to AICD production.
To that end, we transfected APP-Gal4 fusion proteins in CHO cells and measured AICD release by a Gal4 transactivation assay. We first tested the effect of DAPT, a functional gamma-secretase inhibitor. Our data demonstrated, that APP-Gal4 is expressed and processed by the amyloidogenic and non-amyloidogenic pathways in CHO cells. Eight hours of treatment with DAPT (250nM) significantly reduced Aβ production (more than 90% of inhibition), but had no significant affect on Gal4 transactivation . We further showed that Fe65 expression strongly induced Gal4 transactivation. However, we observed that Fe65-transfected cells produced lower levels of extracellular Aβ1-40. We therefore propose that the cleavages leading to extracellular Aβ production and AICD release are different Le précurseur du petite amyloïde (APP), qui joue un rôle central dans la maladie d’Alzheimer, est une protéine membranaire dont la fonction biologique est, à ce jour, encore très peu connue. Les clivages endoprotéolytique de l’APP par les activités α-, β- et γ- sécrétase conduisent à la production d’APP soluble (APPsα) et de peptide amyloïde Aβ. Le clivage γ est également responsable de la libération d’un fragment C-terminal intracellulaire nommée AICD (APP IntraCellular Domain). Celui-ci semble être impliqué dans la signalisation intracellulaire de l’APP.
Fe65 est une protéine adaptatrice qui interagit avec l’AICD mais son rôle dans le métabolisme de l’APP et dans la voie de signalisation dépendante de l’AICD reste encore à élucider. Le but du travail est d’analyser les mécanismes conduisant à la production d’AICD.
Pour cela nous avons exprimé dans des cellules CHO des protéines de fusion APP Gal4 qui permettent de mesurer la libération d’AICD grâce à un test de transactivation de Gal4.
Nos données ont démontré que l’APP Gal4 était exprimé et métabolisé selon les voies cataboliques non-amyloïdogène est amyloïdogène dans les cellules CHO. Nous avosn testé l’effet de DAPT, un inhibiteur fonctionnel de la γ-sécrétase. Huit heures de traitements au DAPT (250nM) réduisent de manière significative ma production de peptide amyloïde (plus de 90% d’inhibition). Cependant, les effets du DAPT mesurés sur la libération d’AICD sont plus faibles. Nous avons ensuite montré que l’expression de Fe65 induisait l’activité transcriptionnelle contrôlée par l’AICD alors qu’elle diminuait la production de peptide amyloïde Aβ. L’ensemble de nos résultats suggère que les clivages menant à la production de peptide amyloïde Aβ et à la libération d’AICD sont distincts

Alzheimer Disease --- Amyloid --- Intracellular Space --- Cricetinae