Choose an application

• Reference Manager
• EndNote
• RefWorks (Direct export to RefWorks)

Achtergrond Melk en melkproducten worden wereldwijd op grote schaal geconsumeerd. Jaarlijks wordt in totaal bijna 1 miljard ton koemelk geproduceerd (Dairy’s Global Impact - IDF - IDF Is the Leading Source of Scientific and Technical Expertise for All Stakeholders of the Dairy Chain, n.d.). Lactose heeft een positief effect op de gezondheid, maar tegelijkertijd is deze de boosdoener voor mensen met een lactose-intolerantie. Dit is een overgevoeligheidsreactie dat zijn oorzaak vindt door een afwezigheid van het enzym lactase, waardoor lactose niet verteerd wordt (Lactose, n.d.).Doel Het doel is om een whole-cell biosensor (WCB) te ontwikkelen voor de detectie van lactose. Deze kan gebruikt worden om de aan- of afwezigheid van lactose in voedingsmiddelen aan te tonen, maar ook als een eenvoudig en veilig model-experiment om de toepassingen van WCB te bestuderen en demonstreren en zodoende interesse voor biowetenschappen te wekken bij het brede publiek.Methode De lactose WCB werd ontwikkeld door een pigmentgen (amilCP blue en UM10E11) met overhangende uiteinde aan te maken en in de pAKTaq plasmide te ligeren in plaats van het gen voor Taq polymerase. Dit genetisch circuit werd getest in E. coli DH5α en BL21-CodonPlus (DE3) RIL cellen. De lactose WCBs werden gekarakteriseerd door middel van dosis-respons curves en getest op verschillende melkproducten.Resultaten Resultaten tonen aan dat de lactose WCB tot expressie komt in aanwezigheid van lactose. Karakterisering door middel van een dosis-respons curve toont aan dat de lineair range voor pAKLac-Blue 0 – 0,2 mM bedraagt met een LOD en LOQ van 0,27 mM en 0,81 mM. Lineair range van pAKLac-Magenta door middel van pellet kwantificatie bedraagt 0 – 0,6 mM met een LOD en LOQ van 0,22 mM en 0,67 mM. Lineair range van pAKLac-Magenta door middel van fluorescentie bedraagt 0 – 0,8 mM met een LOD en LOQ van 0,23 mM en 0,70 mM. Experimenten met toevoeging van lactose aan lactosevrije melk tonen aan dat de aanwezigheid van glucose in dit product de detectie van lactose inhibeert, terwijl deze in magere melk de lactose WCB niet inhibeert.Conclusie Er is een whole-cell biosensor ontwikkeld om lactose in relevante concentraties op te sporen. Hoewel het nut voor didactische doeleinden al aangetoond is, is er nog verder onderzoek vereist om ook lactose te kunnen detecteren in voedingsmiddelen die ook glucose kunnen bevatten.