Choose an application

• Reference Manager
• EndNote
• RefWorks (Direct export to RefWorks)

This eBook is a collection of articles from a Frontiers Research Topic. Frontiers Research Topics are very popular trademarks of the Frontiers Journals Series: they are collections of at least ten articles, all centered on a particular subject. With their unique mix of varied contributions from Original Research to Review Articles, Frontiers Research Topics unify the most influential researchers, the latest key findings and historical advances in a hot research area! Find out more on how to host your own Frontiers Research Topic or contribute to one as an author by contacting the Frontiers Editorial Office: frontiersin.org/about/contact

α-conotoxins --- Three-finger Ly6 proteins --- nicotinic receptors --- Cys-loop receptors --- Voltage-gated ion channels --- receptor complexes --- drug design

Choose an application

• Reference Manager
• EndNote
• RefWorks (Direct export to RefWorks)

Tuberculose is een eeuwenoude ziekte die nog steeds de wereld teistert. Het wordt veroorzaakt door Mycobacterium tuberculosis(Mtb). De geneeskunde slaagt er maar niet in deze ziekte uit te roeien. Er is een duidelijk noodzaak om nieuwe geneesmiddelen te vinden tegen tuberculose. Voor nieuwe geneesmiddelen kunnen nieuwe targets gebruikt worden. Het doel van dit onderzoek is om een moleculair mechanisme in Mtb op te helderen. Het gaat over een type VII secretie system dat virulente eiwitten exporteert: ESX-1. Mtb heeft 5 ESX-type membraantransportsystemen en deze dragen bij tot de virulentie en pathogeniciteit van tuberculose. ESX-1 zit op het celmembraan en heeft een binnenmembraancomplex met vijf onderdelen: EccB, EccC, EccD en EccE, en MycP. Deze studie draagt bij aan het isoleren van EccB1. Mtb’s pathogeniciteit werkt door het ontsnappen uit macrophagen en er is vastgesteld dat ESX-1 daartoe bijdraagt, en de structuur hiervan is nog niet opgehelderd. EccB1 werd eerder tot expressie gebracht in E.coli met als doel om structurele analyse te doen met cryo- elektronen microscopie (“single particle analysis”). De E. coli variant die EccB1 tot expressie brengt was geproduceerd en geverifieerd in het lab van Nanoscopy. Omdat EccB1 oligomeriseert om functioneel te worden is het doel de volledige EccB1 op te zuiveren met transmembranaire helix, want alleen de volledige lengte van EccB1 oligomeriseert. EccB1- NΔ72, een variant van alleen het periplasmatisch domein vormt een monomeer en is niet functioneel. De bijdrage die dit onderzoek geleverd heeft is de optimalisatie van de opzuivering van EccB1 en de biochemische karakterisatie van dit eiwit. De bestaande procedure van Ni-NTA opzuivering en “Size Exclusion Chromatography”(SEC) leverde een goede concentratie van EccB1 op, maar genereerde teveel niet homogene deeltjes van EccB1 wat de analyse van de cryo-EM “micrographs” bemoeilijkt. Het opzuiveringsproces werd verbeterd door een extra stap in te voegen en “Ion Exchange”(IEC) uit te voeren tussen Ni- NTA opzuivering en SEC. Dit verbeterde de resultaten aanzienlijk. EccB1 heeft twee pieken, de focus was op de eerste piek, omdat die veel zuiverder was volgens de SEC resultaten. IEC voor SEC resulteerde in nauwere chromatogrammen en leverde een lagere concentratie op van EccB1, maar de homogeniteit was sterk verbeterd. Na het modelleren van drie periplasmatische domeinen van EccB1 werd deze projectie vergeleken met de “micrograph” van cryo-EM. Daar werd geconcludeerd dat EccB1 paste in dit model. Het opzuiveringsproces moet nog verder worden geoptimaliseerd om een 3D structuur van EccB1 te verkrijgen, maar EccB1 moleculen zijn duidelijk te zien op de geproduceerde cryo-EM “micrographs”.