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Le laboratoire s'intéresse au rôle des lipides bioactifs dans l'inflammation. Dans le cadre de ce mémoire, nous allons particulièrement nous intéresser aux lysophosphatidylinositols (LPI) et à leur récepteur, le récepteur GPR55. En effet, lors d'études préliminaires, le laboratoire a observé une diminution de l'activation des macrophages induite par le lipopolysaccharide (LPS) en présence de LPI. Il nous a donc semblé intéressant de déterminer l'implication du récepteur GPR55 dans l'effet du LPI sur l'activation des macrophages, cellules qui jouent un rôle clé dans les réponses inflammatoires.L'inflammation est un processus biologique ayant pour rôle majeur la défense contre tous types d'agressions. Les monocytes sont parmi les premières cellules du système immunitaire recrutées sur le site de l'agression et vont se différencier en macrophages. Activés, les macrophages vont induire la production de cytokines mais également de médiateurs lipidiques (prostaglandines, leucotriènes,..) synthétisés à partir de l'acide arachidonique. Cet acide gras est libéré sous l'action de la phospholipase A2,entrainant également la libération du LPI. Ce lysophospholipide est l'agoniste endogène principal du GPR55, un récepteur couplé à une protéine G, récemment déorphanisé et considéré pendant un temps comme un récepteur cannabinoide. Par ailleurs, le GPR55 est impliqué dans le développement des tumeurs ainsi que dans la physiologie du système osseux.Pour pouvoir vérifier l'implication du GPR55 dans les effets du LPI, des cellules 1774 (lignée cellulaire de macrophages murins) pour lesquelles le LPI ne diminuait pas l'activation induite par le LPS, ont été transfectées avec un plasmide contenant la séquence codante du GPR55 humain. Après avoir vérifié l'expression du récepteur GPR55 humain dans les cellules transfectées, une sélection clonale a été effectuée.Les effets du LPI ainsi que d'autres ligands du GPR55 ont été testés sur les différents clones obtenus et activés par le LPS. Trois clones ont été sélectionnés pour la suite des études. La présence du récepteur en tant que protéine a été testée par ELISA. Dans les 3 clones, la protéine hGPR55 a pu être observée mais également dans les cellules 1774 sauvages. Le LPI ayant été décrit comme pouvant réguler la prolifération de cellules cancéreuses, nous avons également évalué son effet sur la prolifération cellulaire des cellules transfectées. De manière générale, le LPI induit une diminution de la prolifération cellulaire pour les clones testés. Et finalement, pour déterminer l'activation de la voie de signalisation du GPR55, nous avons vérifié l'activation du second messager ERK.1/2 par western-blet. Une augmentation de l'état phosphorylé est observée dans le clone 12 mais aucune modification en présence du LPI. L'effet du LPI a également été évalué dans des tissus de souris où l'inflammation a été induite par le LPS. Dans le foie, le cervelet et le poumon, le LPI n'induit aucune modification d'expression de cytokines pro-inflammatoires.En conclusion, nous avons mis en évidence une diminution de l'activation des macrophages par le LPI dans certains clones ainsi qu'un effet antiprolifératif du LPI sur ces macrophages. Des études supplémentaires sont requises afin de déterminer l'implication du GPR55 dans les effets du LPI, et le cas échéant déterminer quels récepteurs, si pas le GPR55, sont responsables de ces effets. The laboratory is interested in the raie of bioactive lipids in the inflammation. Inflammation is a biological process essential to hast defense. During inflammation monocytes are among the first cells of the immune system recruited and once in the tissue they differentiate into macrophages. Upon activation macrophages produce, among other mediators, cytokines and lipid mediators (prostaglandins, leukotrienes) derived from arachidonic acid. This fatty acid is released following the action of phospholipase A2, along with lysophosphatidy linositols (LPI). This lysophospholipid is the main endogenous agonist of GPRSS, a recently deorphanized G protein-coupled receptor. To date studies implicated GPRSS in the development of tumors as well as in bone remodeling. Within the framework of this report, we are particularly interested in LPI and the receptor GPRSS in the context of macrophage activation and of inflammation. lndeed, during preliminary studies, the laboratory observed a decrease of the lipopolysaccharide (LPS)-induced activation of a macrophage cell line (J774 cells) in the presence of LPI. Thus, it seemed interesting to determine the implication of GPRSS in the effect of LPI on macrophage activation, as there are key cells in the inflammatory processes. In order to verify the implication of GPRSS in the effects of LPI,J774 cells (a murine macrophage cell line) in which LPI did not decrease LPS-induced activation, were transfected with a plasmid containing the coding sequence of human GPRSS. After confirmat ion of the expression of the human GPRSS receptor in transfected cells, a clonai selection was made. The effects on LPS-induced cell activation of LPI,as well as other ligands of GPRSS, were tested in the various clones obtained. Based on the results, three clones were selected for further investigations. To this end we wanted to detect the protein expression of hGPRSS in these clones, as well as its activation by LPI.Because, LPI was reported to modulate cell proliferation, we also investigated its effects on the proliferation of the clones obtained. Generally, LPI decreased the proliferation of the tested clones.The effect of LPI was also investigated in tissues of mice with LPS-induced inflammation. ln the liver, the cerebellum and the lung, LPI did not affect the LPS-induced expression of pro-inflammatory cytokines.ln conclusion, LPI reduced LPS-induced macrophage activation in some clones and reduced cell proliferation. Further studies are necessary to determine if GPRSS is responsible for the observed effects of LPI,and if not, which receptor(s) are implicated.

GPR55 protein, human --- ‪Lysophosphatidylinositol --- Macrophages

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Macrophages are a key component of the innate immune system and play an integral role in host defense and homeostasis. On one hand, these cells contribute to host defence by triggering inflammation, displaying microbicidal/tumoricidal properties, regulating the activation of adaptive immunity and promoting resolution of inflammation. On the other hand, they contribute to essential trophic functions such as neural patterning, bone morphogenesis and ductal branching in mammary glands. Thus, macrophages are extremely versatile cells that can respond efficiently to tissue microenvironmental cues by polarizing to distinct phenotypes, depending on the functions they need to perform. Indeed, functional diversity and plasticity are hallmarks of these cells. Macrophages may also play a detrimental role. An overwhelming body of literature has indicated their crucial role in pathogenesis. The list includes sepsis, cancer, metabolic syndrome, immunodeficiency, auto-immune disease- virtually impacting every major pathology that we know. These observations have suggested macrophages and their related molecules as potential targets in therapeutic applications. Available evidence proclaims macrophages as a key player in homeostasis, host defense and disease. Crucial developments in the past few years call for a re-evaluation and update of our understanding of macrophages. The present book is an endeavour that attempts to provide state-of-the art knowledge of these cells in health and disease.

Macrophages. --- Histiocytes --- Mononuclear phagocytes --- Antigen presenting cells --- Connective tissue cells --- Killer cells --- Phagocytes --- Reticulo-endothelial system --- Immunology. --- Monoclonal antibodies. --- Microbiology. --- Antibodies. --- Medical Microbiology. --- Microbial biology --- Biology --- Microorganisms --- Antibodies, Monoclonal --- Monoclonal immunoglobulins --- Immunoglobulins --- Molecular cloning --- Immunobiology --- Life sciences --- Serology --- Medical microbiology. --- Antibodies --- Immune globulins --- Immune serum globulin --- Blood proteins --- Globulins --- Plasma cells --- Antibody diversity --- Antigens --- Bacterial immunoglobulin-binding proteins