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Listeria monocytogenes is a facultative intracellular bacterium responsible for listeriosis. In humans, this disease is most common among pregnant women, newborns, and immunocompromised patients. Mortality is around 30%. The current treatment is based on the administration of b-lactams in association with an aminoglycoside but this treatment seems not completely adapted to intracellular forms. Indeed, b-lactams do not accumulate in eucaryotic cells and aminoglycosides accumulate in lysosomes whereas Listeria grow in the cytosol. Quinolones could be a good alternative because they (i) have a good intrinsic activity against Listeria (low MICs), (ii) accumulate in eucarotic cells, and (iii) are localized in the cytosol. For these reasons, we have studied four quinolones, ciprofloxacin, levofloxacin, moxifloxacin, and garenoxacin. First of all, we have characterised the pharmacodynamic properties of quinolones against extracellular Listeria monocytogenes. These results show that (i) quinolones are bactericidal against Listeria and (ii) the activity is concentration-dependent but also progresses over time. Thereafter, quinolone activity was mesured in infected THP-1 monocytes. These cells do not kill Listeria and are permissive to bacterial growth in the cytosol. Quinolones show a bactericidal activity against intracellular Listeria monocytogenes. Nevertheless, these activities are lower than these against extracellular forms (ciprofloxacin becomes even bacteriostatic) although quinolones accumulate 5 to 10 times in THP-1 cells. Finally, the intracellular activity of quinolones was studied in THP-1 cells activated by PMA (PMA activates PKC and differenciates monocytes in macrophages). In these conditions, ciprofloxacin and moxifloxacin activities are increased (350 and 170%, respectively) although these of levofloxacin and garenoxacin are not modified. This increase is coupled with enhanced accumulation (175 and 135%, respectively). The mechanism of this increase of accumulation is not known (we have not shown any effect of the PMA on a potential active transport of quinolones by either the adenin or cystein transporters) Listeria monocytogenes est une bactérie intracellulaire facultative responsable des listérioses. Les populations à risques comprennent les femmes enceintes et les personnes ayant une immunité diminuée. La mortalité des listérioses est élevée, de l’ordre de 30%. Le traitement actuel est basé sur l’administration de b-lactames en association avec un aminoglycoside mais il ne semble pas adapté face aux formes intracellulaires des Listeria monocytogenes. En effet, soit ces antibiotiques ne s’accumulent pas dans les cellules (b-lactames), soit ils s’accumulent dans les lysosomes (aminoglycosides) alors que les Listeria sont croissent dans le cytosol. Les quinolones pourraient être une bonne alternative car (i) ils ont une bonne activité intrinsèque vis-à-vis de Listeria (CMI basses), (ii) ils s’accumulent dans les cellules eucaryotes et (iii) ils sont localisés dans le même compartiment que ces bactéries. Pour ces raisons nous avons étudié quatre quinolones, la ciprofloxacine, la levofloxacine, la moxifloxacine et la garenoxacine. Nous avons, dans un premier temps, caractérisé les propriétés pharmacodynamiques des quinolones face aux Listeria monocytogenes extracellulaires. Ces résultats montrent que (i) les quinolones sont bactéricides face aux Listeria et (ii) l’activité est concentration-dépendante et augmente au cours du temps. Ensuite, l’activité des quinolones a été mesurée dans des monocytes THP-1 infectés par Listeria monocytogenes. Ces cellules ne sont pas capables de tuer les Listeria et son permissives à leur croissance. Les quinolones présentent une activité bactéricide face aux formes intracellulaires de Listeria. Cette activité est toutefois plus faible comparée à leur activité en bouillon (la ciprofloxacine devient bactériostatique) malgré que les quinolones étudiées s’accumulent entre 5 et 10 fois dans les THP-1. Enfin, l’activité intracellulaire des quinolones a été comparée à celle mesurée dans des THP-1 activées au PMA (un activateur de la PKC qui entraîne une différenciation des monocytes en macrophages). Dans ces conditions, l’activité de la ciprofloxacine et de la moxifloxacine est augmentée (respectivement 350 et 170% d’activité) alors que celle de la levofloxacine et le garenoxacine n’est pas modifiée. Cette augmentation est couplée avec une accumulation accrue de ces antibiotiques (respectivement 175 et 135% d'accumulation). Le mécanisme de cette augmentation d’accumulation n’est pas connu (nous n’avons pas montré d’effet du PMA sur un éventuel transport actif des quinolones par les transporteurs de l’adénine et de la cystéine)

Listeria Monocytogenes --- Quinolones --- Macrophages

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Obesity belongs to a cluster of metabolic abnormalities (insulin resistance, type 2 diabetes, hypertension, dyslipidemia and hypofibrinolysis) leasing to an increased risk for cardio-vascular disease. There related disorders are components of the Metabolic Syndrome. It has become clear from epidemiological studies that some increase in the adipose tissue mass antedates the development of other disorders.
Adipose tissue (adipose and stromal-vascular fractions) synthesize and release a variety of peptides which may have regulatory properties. I have studied one of these peptides: adiponectin (ApN) is mainly synthesized by mature adipocytes. This hormone has a protective role against atherosclerosis, enhances insulin sensitivity and fatty-acid oxidation. Plasma ApN levels are paradoxically decreased in obese subjects.
To understand this paradoxical decrease, I have studied ApN regulation in visceral fat of lean and obese subjects and examined the contribution of the different adipose tissue fractions to ApN secretion. I have also studied the regulation of ApN gen expression in a non-fat cell, target for the anti-atherogenic effect of ApN , the macrophage.
ApN secretion by visceral adipose explants is decreased in obese subjects. Data from co-cultures (adipocytes / stromal-vascular cells) and adipocyte cultures in conditioned media suggest that stromal-vascular cells may stimulate ApN secretion by adipocyte of lean subjects. However, adipocytes of obese individuals seemed to be resistant to this stimulation. A factor released by stromal-vascular cells could regulate ApN secretion by adipocytes.
We next studied ApN gene regulation in murine macrophages in vivo and in vitro. Intraperitoneal injection of LPS (lipopolyasacharide) to mice reduced plasma ApN levels, but increased ApN mRNA levels in the spleen, a representative organ of mononuclear-macrophage system. In vitro, combination of INF-γ with several cytokines increased ApN Mrna in cultured peritoneal macrophages, while these cytokines exert a well-known inhibitory effect on ApN expression in adipocytes.
In conclusion, a factor released by stromal-vascular cells may regulate ApN secretion in human visceral adipose tissue. Cytokines may induce ApN expression in macrophages, an effect opposite to that observed in adipose tissue L’obésité est un facteur de risqué important, voire crucial dans la pathogénie d’une constellation d’anomalies métaboliques (insulino-résistance, diabète de type 2, hypertension artérielle, dyslipémie et hypofibrinose,…) connu sous le nom de syndrome pluri métabolique. Le tissu adipeux, composé d’une fraction adipocytaire et d’une autre stromale-vasculaire, synthétise et sécrète un grand nombre de facteurs bioactifs, les adipocytokines. Ces dernières on un rôle potentiel dans la pathogénie de ce syndrome. Parmi les adipocytokines, l’adiponectine (ApN) est quasi exclusivement synthétisée par les adipocytes matures. Chez le sujet obèse, les taux circulants d’ApN sont diminués par rapport au sujet mince. Afin de comprendre cette diminution, a priori surprenante, nous avons étudié la régulation de l’ApN dans le tissu adipeux de sujets minces et obèses et examiné la contribution des différentes fractions de ce tissu à la sécrétion d’ApN. Nous avons élargi cette étude à la régulation de l’expression du gène ApN dans une cellule non-adipeuse, me macrophage.
Nous avons d’abord confirmé l’existence dans le plasma du monomère d’ApN 530 kDA) dans des conditions réductrices, ainsi que celle de complexes de plus haut poids moléculaire dans les conditions natives. In vitro, la sécrétion d’ApN par les explants de tissu adipeux viscéral est diminuée chez les sujets obèses. Nous avons mené des expériences de co-culture (adipocytes/ cellules stromales-vesculaires) ainsi que des cultures d’adipocytes en milieu conditionné par des cellules stromales-vasculaires. Les cellules stromales-vasculaires stimulerait la sécrétion d’ApN par les adypocytes de sujets minces. Par contre, les adipocytes de sujets obèses semblent résistants à cette stimulation. Il existerait donc un facteur libéré par la fraction stromale-vasculaire contrôlant la production d’ApN par les adipocytes.
Nous avons ensuite étudié la régulation de l’ApN dans les macrophages murins in vivo et in vitro. Chez la souris, le traitement au LPS (lipopolysaccharide) diminue les taux plasmatiques d’ApN lais par contre, augmente les taux d’ARNm ApN dans la rate, organe représentatif du système mononucléaire-macrophage. In vitro, l’association de plusieurs cytokines augmente les taux d’ArNm ApN dans des macrophages péritonéaux en culture, alors qu’elle exerce un effet inhibiteur bien connu sur l’expression de ce gène dans le tissu adipeux

Adipose Tissue --- Macrophages --- Blotting, Northern --- Blotting, Western

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During the past decade, the rapid growth of molecular and cellular knowledge of macrophages, as a specialized host defense and homeostatic system, has begun to offer attractive targets for therapeutic intervention. Macrophages play a central role in a wide range of disease processes, from genetically determined lysosomal storage diseases, to acute sepsis, chronic inflammation and repair, tissue injury and cell death. Under- or overactivity of macrophage clearance, immune effector functions and responses to metabolic abnormalities contribute to common disorders such as autoimmunity, atherosclerosis, Alzheimer’s disease and major infections including AIDS and Tuberculosis. Whilst the goals of therapeutic intervention based on improved understanding of macrophage functions and their contribution to pathogenesis may seem self evident, there are considerable difficulties in producing useful new agents. The present volume covers a range of subjects and provides opportunities for a more focused macrophage-targeted approach. The individual chapters review selected topics briefly, to place cellular processes and molecular targets in perspective. Overall, the volume should provide a broad sample of the state of the art. Useful reviews and references in the literature are cited within individual chapters.

Antigen Presentation --- Drug Delivery Systems. --- Drug Therapy --- Drug targeting. --- Macrophages --- Macrophages. --- Phagocytosis --- Drug effects. --- Methods. --- Immunology. --- Immunology. Immunopathology --- Histology. Cytology --- Pharmacosynthesis. Pharmacochemistry --- Pharmacology. --- Virology. --- Pharmacology/Toxicology. --- Microbiology --- Drug effects --- Medical pharmacology --- Medical sciences --- Chemicals --- Chemotherapy --- Drugs --- Pharmacy --- Immunobiology --- Life sciences --- Serology --- Physiological effect