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La maladie d’Alzheimer est une démence dégénérative caractérisée par deux lésions neuropathologiques, les dégénérescences neurofibrillaires et les plaques séniles. Le constituant majeur des dépôts amyloïdes des plaques séniles est un peptide appelé βA4. Il dérive d’un précurseur transmembranaire appelé APP (Amyloid Peptide Precursor). L’étude du métabolisme de l’APP est importante pour comprendre la formation des dépôts amyloïdes de la maladie d’Alzheimer. Dans des modèles cellulaires, deux voies cataboliques de l’APP ont été mises en évidence : la voie non amyloïdogène dans laquelle de l’APP soluble est produit par clivage de la protéine au sein même du peptide βA4, et la voie amyloïdogène donnant naissance au peptide amyloïde.
Des cellules CHO ont été cotransfectées par le plasmide pSVK3 comprenant l’ADNc de l’APP 695 et le plasmide pSV2néo, qui contient un gène de résistance à la néomycine. Un des clones obtenu après sélection au G418, produit dans son milieu de culture, l’APP soluble et du peptide βA4 reconnus par des anticorps spécifiques en immun précipitation.
Dans le but d’étudier le rôle de l’internalisation de l’APP transmembranaire dans la formation du peptide βA4, deux méthodes ont été utilisées pour inhiber l’endocytose dans des puits tapissés de clathirine. D’une part, les cellules transfectées ont été cultivées en absence de K+, ce qui provoque des perturbations au niveau de l’assemblage de la clathirine, empêchant l’internalisation des protéines par endocytose. Dans ces conditions expérimentales, l’internalisation de la transferrine, liée à son récepteur, est fortement diminuée. La privation de k+, si elle ne dépasse pas une heure, n’est pas novice pour les cellules, dont la viabilité a été mesurée par le test MTT. Dans le milieu de culture des cellules marquées à a la S-méthionine, puis privées de K+ pendant une heure, l’APP soluble est immunoprécipité. Par contre, le peptide βA4 n’est pas détecté dans ce milieu de culture.
D’autre part, des cellules CHO ont été co-transfectés de manière stable avec le plasmide pSVnéo et le plasmide pSVK3 comprenant l’ADNc de l’APP 695, délété de la séquence codant le domaine C-terminal intracellulaire. Cette délétion a pour conséquence d’éliminer la séquence en acides aminés NPTY, qui joue probablement un rôle dans l’internalisation de l’APP par endocytose dans des puits tapissés de clathrine. Un clone a été sélectionné au G418. Dans le milieu de culture alors que l’APP soluble est produit en quantité supérieure à ce que produisaient les cellules transfectées par l’ADNc de l’APP 695 complet.
Ces résultats montrent que l’inhibition de l’internalisation empêche la formation de peptide βA4. L’endocytose de l’APP transmembranaire dans des puits tapissés de clathrine est donc impliquée dans la production du peptide amyloïde de la maladie d’Alzheimer.

Alzheimer Disease --- Amyloid beta-Protein Precursor --- CHO Cells