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Suite à l’hybridation d’un Zoo-blot avec une sonde P1A de souris, nous avons tenté d’isoler l’équivalent levure du gène P1A de souris. Nous avons réussi à cloner quatre fragments par la sonde.
Nous avons tout d’abord construit une banque d’ADN génomique de levure dans le vecteur pBuescript SK-. Nous avons isolé et séquencé deux fragments EcoRi (0,6 et 0,8 kb) qui hybridaient avec la sonde. Le fragment de 600 bases est identique au gène de levure RAD6. Ce gène est impliqué dans la sporulationet dans la réparation des dommages causés à l’ADN par les rayonnements UV. La séquence du fragment de 800 bases n’est pas connue. La comparaison des séquences avec celle de l’ADN complémentaire de P1A montre que le gène RAD6 possède 46 % d’identité avec P1A. La séquence du fragment de 0,8 kb présente une faible (17 %) homologie avec l’ADNc de P1A. La séquence protéique de RAD6 a été comparée avec la séquence de la protéine P1A : RAD6 est identique à 14 % avec P1A.
Afin d’isoler les fragments de plus grande taille ( de 4 à 7,5 kb) nous avons alors construit une banque enrichie d’ADN génomique de levure dans le bactériophage λgt10. Cette banque nous a permis de cloner deux fragments EcoRI de 4,6 à 5,2 kb. Leur séquence a été déterminée et comparée aux séquences présentes dans la banque de données Genbank. Ces deux séquences ne sont pas connues.
Nous les avons comparées avec la séquence de l’ADN complémentaire de P1A. la séquence du fragment de 4,6 kb montre 40 % avec celle de P1A. Le fragment de 5,2 kb ne possède que 34 % d’identité avec P1A.
Nous avons découvert une ORF codant pour une protéine de 191 acides aminés dans le fragment de 4,6 kb. Sa séquence protéique possède 72 % d’identité avec la protéine de levure SIS2. Cette protéine interviendrait dans la stimulation des cyclines de la phase G1.
Une analyse de structures des trois protéines par la méthode HCA suggère qu’aucune de celles-ci ne possède une structure comparable à celle de la protéine de souris P1A.

Yeasts --- T-Lymphocytes --- Antigens, Neoplasm --- Medical Laboratory Science

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Bone Marrow Transplantation --- CD4-Positive T-Lymphocytes --- Graft vs Host Disease --- T-Lymphocytes, Cytotoxic --- immunology --- immunology --- immunology --- immunology

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Des lymphocytes du sang périphérique provenant d’une patiente atteinte d’un cancer du rein ont été stimulés in vitro par des cellules tumorales LE9211-RCC autologues établies en culture. Suite à cette stimulation, les lymphocytes T ont été clonés et plusieurs clones de lymphocytes T cytolytiques (CTL) lysant spécifiquement la tumeur ont été obtenus. Nous avons déterminé l’élément de restriction par lequel les clones CTL reconnaissent leur antigène. Deux groupes de CTL ont ainsi pu être définis : le premier reconnaissant un antigène en association avec HLA-B7 et l’autre reconnaissant un antigène en association avec HLA-A3. La spécificité des clones CTL 263/17 et 263/45 restreints par HLA-B7 a été analysée plus en détail. Ils ne reconnaissent pas des cellules épithéliales du tube proximal du rein normal provenant de patients HLA-B7. En revanche, les deux clones CTL reconnaissent également une autre lignée de tumeur de rein. Par une méthode de transfection dans des cellules COS-7 d’une bibliothèque d’ADNc construite à partir de l’ARNm provenant des cellules LE9211-RCC, nous avons isolé un gène codant l’antigène reconnu par le clone CTL 263/17.

Cloning, Molecular --- Kidney Neoplasms --- Antigens, Neoplasm --- T-Lymphocytes, Cytotoxic --- Medical Laboratory Science

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T-Lymphocytes, Cytotoxic --- Graft Rejection --- Heart Transplantation --- HLA Antigens --- Kidney Transplantation --- immunology --- immunology --- immunology --- immunology

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CD4-Positive T-Lymphocytes --- Cytotoxicity, Immunologic --- Interferon-gamma --- Interleukin-4 --- Mycobacterium leprae --- Antigen-Presenting Cells --- immunology --- biosynthesis --- biosynthesis --- immunology --- immunology