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Les recherches qui sont à la base de ce mémoire s’inscrivent dans le cadre d’un programme d’étude des antigènes présents sur les protéines des virus de l’immunodéficience humaine.
A mon arrivée dans le laboratoire, des anticorps (Ac) monoclonaux dirigés contre la protéine majeure de la capside du VIH-1 avaient déjà permis l’isolement d’un nombre de clones E. coli exprimant des fragments de la P25 sous forme d’une protéine recombinante. Au cours de ce travail, de nouvelles colonies ont été sélectionnées et l’ensemble a finalement permis de couvrir toute la séquence de cette protéine.
Il m’a alors été possible d’utiliser les colonies et les épitopes ainsi définis pour analyser la réponse humorale (Ac) de sujets infectés par le VIH.
Comme l’indique le titre de ce mémoire, le projet était de décomposer les Ac polyclonaux des sérums en fonction des sites antigéniques et si possible, des épitopes qu’ils reconnaissaient.
La difficulté que posait cette étude est celle du « bruit de fond » : dans le système d’expression utilisé, la protéine P25 est produite dans E. coli ; or tous les sérums reconnaissaient des protéines de cette bactérie, le problème est donc de différencier les clones n’exprimant que des protéines d’E. coli.
Dans une première étape, une méthode d’absorption a dû être mise au point.
Ensuite, pour mieux standardiser le procédé et éliminer une partie des protéines d’E. coli, une purification des protéines recombinantes a été réalisée.
Enfin, pour permettre la détection des Ac dirigés contre un épitope donné, nous avons utilisé une technique basée sur l’inhibition de l’attachement de l’Ac monoclonal spécifique.

Antigen-Antibody Reactions --- Medical Laboratory Science

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Nous avons étudié de manière approfondie la réponse anti-tumorale médiée par les lymphocytes T cytolytiques (CTL : Cytolic T Lymphocytes) chez un patient porteur d’un mélanome.
Des cellules mononuclées du sang périphérique ont été stimulées in vitro par des cellule tumorales autologues dont une culture stable avait pu être établie. Suite à cette culture de masse, les lymphocytes T ont été clonés et plusieurs clones CTL lysant spécifiquement la tumeur ont été obtenus. Quelques-uns de ces clones ont été utilisés lors d’immunosélections des cellules tumorales en vue d’obtenir des variants tumoraux de perte d’antigène. Les variants obtenus permirent la mise en évidence de quatre antigènes différents, reconnus par des CTL à la surface des cellules tumorales.
Nous avons ensuite utilisé une technique de dilution limite des lymphocytes circulants pour évaluer la fréquence des CTL anti-tumoraux dans le sang. Chez ce malade, cette fréquence est très élevée : environ un précurseur de CTL spécifique anti-tumoral pour 1000 cellules mononuclées. Au moyen de différents variants tumoraux de perte d’antigène, nous avons observé que les précurseurs de CTL dirigés contre l’un des quatre CTL anti-tumoraux.
Face à cette prédominance ‘un type de CTL, nous avons analysé le répertoire lymphocytaire dirigé contre l’antigène dominant. Pour ce faire, la séquence de la chaîne ß du récepteur T d’une série de clones CTL spécifiques de l’antigène a été déterminée. Cette analyse génétique a révélé que tous les clones CTL dirigés contre l’antigène dominant possèdent la même chaîne ß. Ils sont donc issus d’un même précurseur qui s’est fortement multiplié in vivo.

T-Lymphocytes, Cytotoxic --- Antibody Diversity --- Clone Cells --- Medical Laboratory Science

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Myasthenia Gravis --- Antigen-Antibody Complex --- Autoimmune Diseases --- Receptors, Cholinergic --- Immunoglobulin Idiotypes --- immunology --- analysis

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Immunologic Techniques. --- Antibody Dissociation --- Immunologic Technic --- Immunologic Technics --- Immunologic Technique --- Immunological Technics --- Immunological Techniques --- Technic, Immunologic --- Technics, Immunologic --- Technique, Immunologic --- Techniques, Immunologic --- Antibody Dissociations --- Dissociation, Antibody --- Dissociations, Antibody --- Immunological Technic --- Immunological Technique --- Technic, Immunological --- Technics, Immunological --- Technique, Immunological --- Techniques, Immunological --- Allergy and Immunology --- Immunity --- Immunochemistry --- methods --- Immunodiagnosis --- Immunology --- Handbooks, manuals, etc. --- Immunologic Techniques --- Immunobiology --- Life sciences --- Serology --- Immunological diagnosis --- Clinical immunology --- Diagnosis, Laboratory --- Immunoassay --- Handbooks, manuals, etc

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Immunology. Immunopathology --- Antibodies, Monoclonal. --- Monoclonal antibodies --- -Antibodies, Monoclonal --- Monoclonal immunoglobulins --- Immunoglobulins --- Molecular cloning --- Monoclonal Antibodies --- Hybridomas --- Laboratory manuals --- 616-097 --- 57.086.8 --- 57.083.3 --- Antibodies, Monoclonal --- Laboratory manuals. --- Antigens. Antibodies --- Methods and equipment for studying living cells and tissues --- Immunological methods and techniques --- -Laboratory manuals --- 57.083.3 Immunological methods and techniques --- 57.086.8 Methods and equipment for studying living cells and tissues --- 616-097 Antigens. Antibodies --- Monoclonal Antibody --- Antibody, Monoclonal