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La maladie d’Alzheimer est caractérisée par deux lésions neuropathologiques essentielles : les dégénérescences neurofibrillaires intraneuronales et les plaques séniles extracellulaires.
Le constituant majeur du noyau amyloïde des plaques séniles est un peptide de 42 acides aminés, le peptide ßA4. Il dérive d’un précurseur transmembranaire plus grand : l’APP (Amyloid Precursor Protein). Dans les cellules en culture, l’APP est clivé entre les acides aminés 15 et 17 du peptide ßA4. Ce clivage est réalisé par une enzyme appelée « APP sécrétase ». Or, le peptide ßA4 est retrouvé entier au sein des plaques séniles ; il y a donc lieu de penser que, dans la maladie d’Alzheimer, le mécanisme de clivage normal est perturbé.
L’APP est une phosphoprotéine pouvant servir de substrat à la protéine Kinase C (PKC), dont l’activité est diminuée chez les patients atteints de la maladie d’Alzheimer. Nous avons étudié l’influence de l’activation et de l’inhibition de la PKC sur le clivage de l’APP. A cette fin, des cellules Cho ont été transfectées par l’ADNc de l’isoforme transmembranaire APP 770. Le marquage métabolique des cellules transfectées, à l’aide de méthioninel [35S], et l’immunoprécipitation des protéines solubles du milieu de culture par un anticorps anti-APP ont permis de mettre en évidence une forme soluble de l’APP résultant du clivage de la protéine transmembranaire.
Lorsque les cellules transfectées sont incubées en présence de 1 μ M de phorbol 12, 13-dibutyrate (PDBU : ester de phorbol activant la PKC), la quantité d’APP 770 soluble immunoprécipitée dans le milieu de culture augmente. Par contre, si la staurosporine (inhibiteur de la PCK) est utilisée, la quantité de forme retrouvée dans le milieu est réduite.
En parallèle, des cellules CHO ont été transfectées par l’ADNc 563, une isoforme plus courte qui ne possède pas de domaine transmembranaire. Cette protéine est donc sécrétée sans clivage protéolytique. Les milieux de culture des cellules CHO exprimant ce précurseur ont également fait l’objet d’immunoprécipitations. L’incubation préalable de ces cellules avec du PBBU ou de la staurosporine ne modifie en rien la quantité d’APP 563 retrouvée dans le milieu de culture.
Ces résultats montrent que l’activation en inhibition de la PKC influencent très significativement le clivage de l’APP transmembranaire par l’APP sécrétase.

Alzheimer Disease --- Amyloid beta-Protein Precursor --- Protein Kinase C --- Medical Laboratory Science