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Nous avons généré des cellules dendritiques (DC), définies comme les cellules CD12+ CD14-, par culture (GM-CSF, IL-4 pendant 7 jours et TNFα les dernières 48h) des cellules sanguines mononuclées de sujets normaux dans différentes conditions de sérum (sérum AB, sérum autologue et sérum de veau fœtal). Nous avons comparé la génération de DC à partir de PBMCs déplétés en lymphocytes T, entre des sujets normaux et es patients atteints de LMC.
Le nombre absolu et le pourcentage de DC générés ne sont pas significativement différents. Cependant nous avons observé un pourcentage significativement plus faible dans l’expression du CD80 sur l’ensemble de la culture chez les patients atteints de LMC. La différence semble liée au type, différent, de cellules contaminant les cultures dans ces deux groupes.
Le pourcentage de CD2 est significativement plus élevé chez les sujets normaux, alors que la population contaminante chez les patients est de type leucémique.
Les autres marqueurs contrôlés (CD54, CD58, DR, HLA I) sont exprimés de manière similaire. Nous avons contrôlé, par FISH, la positivité des DC des patients pour le chromosome Ph+ et observé un pourcentage très élevé.
Pour deux couples de patient-donneur HLA identique, nous avons effectué des séries de MLRs en situation naïve, en utilisant 4 sources de cellules stimulantes, les DC du patient seules, les cellules leucémique seules, les PBMCs totales du patient seules, et une mélange de DC et leucémiques. Les cellules répondeuses correspondaient aux PBMCs totales du donneur.
La culture des cellules leucémiques est effectuée pendant 10 jours dans un milieu contenant de l’IL3, l’IL6, SCF, G-CST, INγ les dernière 48 heures.
Aucune des MLRs au départ de PBMCs totales n’a montré de prolifération.
Dans les trois autres conditions, nous avons obtenue différentes lignées lymphocytaires à partir de MLRs débutées en plaque 96 puits.
Certaines des lignées générées étaient majoritairement ( ≥80%) CD8+ ou CD4+. Nous avons réalisé des tests de libération de chrome 51, après 6 semaines d’expansion.
Aucune de ces lignées n’a montré d’activité cytotoxique ou d’activité LAK franche. Des tests de stimulation de prolifération des lignées n’ont montré d’activité cytotoxique ou d’activité LAK franche. Des tests de stimulation de prolifération des lignées CD4+, ont montré une prolifération HLA DR-restreinte, mais non spécifique des cellules leucémiques et ne pouvant pas distinguer les cellules du patient de celles du donneur.
Nous avons dosé l’IFn γ et l’IL4 dans les surnageants de culture, afin d’apprécier l’environnement T1/T2 des lignées.
Toutes les lignées CD8+ se trouvaient dans un environnement T2, avec un taux en IL4 élevé et un faible taux d’IFNγ.
Nous pensons qu’il est possible de générer des DC chez les patients, atteintes de LMC, à partir du sang périphérique, avec une probabilité d’obtenir des DC ph+, mais que la pureté de ces cellules reste faible, dur à la présence de cellules leucémiques.
Cette population stimulante utilisée dans de telles conditions ne mènent pas à la génération de CTLs.
LA modification du mode de leur utilisation est nécessaire

Leukemia, Myeloid, Chronic --- Immunotherapy --- Transplantation, Homologous --- Medical Laboratory Science

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[…]On a voulu montrer toute la série d’ostéosarcomes afin de donner une image, la plus réelle possible, de ce qui peur arriver dans un service spécialisé avec l’ensemble de patients porteurs de cette pathologie, très variée et capricieuse, qui demande beaucoup d’attention. Cette variance permettra d’avoir une idée de la multitude de problèmes auxquels est confrontée une équipe multidisciplinaire.
Le but est d’analyser de façon stricte le diagnostic ,la chimiothérapie, le choix de la chirurgie, les complications diverse et de regarder quel est l’apport des allogreffes dans l’ensemble des méthodes utilisées pour cette série.
Dans la partie finale, nous analysons les résultats préliminaires de 19 cas de reconstruction de fémur par des allogreffes. Cette série correspond aux cas de chirurgie de sauvetage par reprise de prothèse de hanche avec une perte majeure de stock osseux. L’objectif est de montrer une nouvelle expérience depuis 3 ans, où la reconstruction par des allogreffes massives représente une alternative possible à considérer.

Reconstructive Surgical Procedures --- Orthopedics --- Transplantation, Homologous --- Osteosarcoma --- Prospective Studies --- Arthroplasty, Replacement, Hip