Choose an application

• Reference Manager
• EndNote
• RefWorks (Direct export to RefWorks)

Choose an application

• Reference Manager
• EndNote
• RefWorks (Direct export to RefWorks)

Choose an application

• Reference Manager
• EndNote
• RefWorks (Direct export to RefWorks)

Choose an application

• Reference Manager
• EndNote
• RefWorks (Direct export to RefWorks)

Choose an application

• Reference Manager
• EndNote
• RefWorks (Direct export to RefWorks)

Begin 2016 werd in UZ Gent op de afdeling Moleculaire Diagnostiek-Hematologie een pipetteerautomaat aangekocht voor automatische DNA-isolatie, namelijk de Hamilton Genomic STARlet. Deze bachelorproef beschrijft de optimalisatie van de automatische DNA-isolatie uit EDTA volbloed en witte bloedcel-isolaat met behulp van de Hamilton STARlet en de NucleoMag® Blood 200 μl kit van Macherey-Nagel. Deze methode steunt op een extractie aan de hand van magnetische beads. De protocollen voor DNA-isolatie uit volbloed en WBC-isolaat geleverd bij de NucleoMag® Blood 200 μl kit zijn bedoeld voor manuele DNA-isolatie. Daarom moeten de protocollen eerst geoptimaliseerd worden om geschikt te zijn voor automatische DNA-isolatie. In deze bachelorproef wordt beschreven hoe deze optimalisatie verlopen is en welke aanpassingen er aan het protocol gebeurd zijn om met de Hamilton STARlet DNA van goede kwaliteit te bekomen. Het is belangrijk dat de kwaliteit en hoeveelheid van het DNA-isolaat bekomen met de Hamilton STARlet vergelijkbaar is met deze van de huidige methode aan de hand van de QIAcube en QIAamp DNA Blood Mini kit (QIAgen). Daarom zullen de resultaten vergeleken worden met deze huidige methode. De vergelijking gebeurt door PCR uit te voeren op de bekomen isolaten met beide methodes en door de DNA concentratie in de eluaten te meten. Men wil in de toekomst niet enkel de DNA-isolatie automatiseren met de Hamilton STARlet maar ook de PCR set-up. Om deze reden werden reeds de meest courant gebruikte enzymen voor PCR in de afdeling Moleculaire Diagnostiek-Hematologie uitgetest op hun stabiliteit op kamertemperatuur, aangezien het toestel niet gekoeld is en deze enzymmixen gedurende een volledige run op het toestel zouden moeten staan. Het gaat om Platinum qPCR Supermix en SsoFast EvaGreen Supermix. In de literatuurstudie wordt het belang van de DNA-isolatie geïllustreerd door een overzicht te geven van de verschillende PCR-methodes die in UZ Gent uitgevoerd worden op DNA-isolaten. Per methode wordt ook een praktisch voorbeeld van een bepaling gegeven om het klinisch nut van de analyse te onderstrepen.