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Le mésothéliome malin est un cancer rare, généralement causé par une exposition à l’asbeste et affectant les membranes séreuses des cavités pleurales et péritonéales. A l’heure actuelle, les stratégies thérapeutiques restent peu efficaces, engendrant son mauvais pronostic. Les similitudes entre les fibres d’amiante et les nanotubes de carbone (CNT), notamment leur capacité à induire le mésothéliome, rendent l’utilisation de ce matériau préoccupante pour la santé publique. Des recherches expérimentales sont donc nécessaires pour mieux comprendre les mécanismes pathogéniques menant au mésothéliome induit par les fibres d’amiante et les nanotubes de carbone. Notre projet a pour but de caractériser les réponses immunosuppressives lors du développement di mésothéliome chez le rat traité aux CNT. Il est maintenant connu que des cellules immunosuppressive sont présentes dans le microenvironnement tumoral ; elles inhibent l’immunité innée et adaptative, déstabilisent la surveillance immunitaire et empêchent les réponses immunitaires anti-tumorales. Nous déterminons en particulier si les réponses cancérigènes précoces aux CNT Mitsui-7 (CNT-7) sont associées à l’accumulation de macrophages immunosuppresseurs. Nous utilisons un modèle péritonéal chez le rat Wistar qui permet d’exposer directement les cellules mésothéliales aux CNT ou à l’asbeste, et de prélever facilement des échantillons de la cavité séreuse afin d’évaluer les réponses macrophagiques durant le processus cancérigène. Nous avons confirmé que les macrophages CD11b/c high et his48int présents dans le microenvironnement du mésothéliome induit par les CNT-7 et triés par FACS ont la capacité d’inhiber l’activation polyclonale des lymphocytes T in vitro. Ces macrophages suppresseurs sont déjà présents, grâce à une prolifération locale, lors de la réponse précoce aux CNT cancérigènes ou à l’asbeste (jour 1 à 30) , bien avant le développement du mésothéliome (6 mois). Ces cellules accumulées de manière précoces n’ont pas été observés chez la souris, résistante au mésothéliome induit par les CNT-7. L’analyse de l’expression des gènes immunosuppresseurs (RT-qPCR) a révélé que les macrophages péritonéaux de rats traités aux CNT (jour 1 à 30) expriment fortement les médiateurs immunosuppresseurs IL-10 et Arginase-1, comparativement aux macrophages péritonéaux naïfs ou aux macrophages obtenus après traitement à la silice, une particule n’induisant pas le mésothéliome. Dès lors nos données indiquent que les nanotubes cancérigènes possèdent la capacité d’induire une accumulation préférentielle, rapide et soutenue de macrophages immunosuppresseurs avant que le mésothéliome ne soit établi. Cette accumulation de macrophages immunosuppresseurs lors du développement du mésothéliome supporte l’utilisation des réponses immunosuppressives pour détecter les nanomatériaux mésothéliomagéniques. MM is a rare cancer caused by asbestos exposure affecting the serous membrane of pleural and peritoneal cavities. MM remains a highly refractory cancer to existing therapeutic strategies. The asbestos-like toxicity of engineered carbon nanotubes (CNT). Notably their capacity to induce malignant mesothelioma (MM), is a serious cause of concern for public health. Intensive research efforts are therefore needed to better understand the pathomechanisms of CNT-induced MM. The present project deals with immunosuppression during the mesothelial response to CNT in rats. There is growing evidence that tumors harbor immunosuppressive cells that inhibit both innate and adaptive immunity, subverting immune surveillance and preventing efficient natural or therapeutic anti-tumor immune responses. We aim to determine if the carcinogenic response to Mitsio-7 CNT (CNT-7) is associated with accumulation of immunosuppressive macrophages. We used a Wistar rat peritoneum model which allows directly exposing mesothelial cells to CNT or asbestos, and easily sampling the mesothelial cavity for monitoring macrophage responses during the carcinogenic process. We show that FACS-sorted CD11b/c high and His48int macrophages present in CNT-7 induced mesothelioma microenvironment suppress polyclonal activation of T lymphocytes in vitro. The inhibitory macrophages are already present during the early response to carcinogenic CNT or asbestos (day 1 to 30), well before the establishment of mesothelioma (6 months). Immunosuppressive peritoneal macrophages were not observed in mice, which are resistant to mesothelioma development upon CNT-7. RTqPCR revealed that peritoneal macrophages purified from CNT-treated rats (day 1-30) highly expressed the immunosuppressive mediators IL-10 and Arginase-1 in comparison to naïve peritoneal macrophages or macrophages obtained after silica, a particle that does not induce mesothelioma. Altogether, our data demonstrate that carcinogenic CNT possess the intrinsic capacity to induce a preferential, rapid and sustained accumulation of immunosuppressive macrophages before mesothelioma is established. These data provide new insight into the possible contribution of immunosuppression in the early pathogenic processes of CNT-induced mesothelioma.
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Theiler’s virus produces, according to the strain, an acute or chronic disease of the central nervous system of the mouse. The neurovirulent strains such as GD7 produce a fatal encephalitis while persistent strains such as DA induce a persistent disease and demyelisation in susceptible mice, despite the immune response. The persistent strain DA unlike the neurovirulent strain GD7 synthesis a protein called 1*. The latter protein increases the infection rate of macrophages by the virus. Macrophages are thought to play an important role in viral persistence and probably in the pathology induced by the virus. Enhancement of macrophage infection by protein 1* was reported to correlate with an antiapoptotic activity of this protein.
Cellular mutants resistant to the GD7 virus have been derived L929 cells in our laboratory. Those mutants have benne classified into 3 groups according to their resistance of susceptibility to different viruses. Some of these cellular mutants (including L929#25 and L929#34) exhibit a particular profile when infected by those viruses. It has turned out that the 1* protein and the replication regions (2A to 3B proteins), beside the viral capsid, influence the infection of these cellular mutants.
We have shown that the presence of the 1* protein and of the 2A-3B region of the DA virus enhance the infection of macrophages. Thos results prompted us to further characterise the L929#25 and L929#34 cellular mutants. We observed that the resistance of those mutants involve a very early stage of the viral cycle (probably just after or the entry of the virus into the cell) and not an increase of their susceptibility to apoptosis as we previously thought. We also constructed and tested new recombinant viruses in attempt to identify the factor of the 2A-3B region that promotes the infection of macrophages and of the cellular mutants. Le virus de Theiler provoque, selon les souches, une maladie aiguë ou chronique du système nerveux central de la souris. Les souches neurovirulentes, comme la souche GD7, provoquent une encéphalite mortelle tandis que les souches persistantes comme la souche DA causent, chez les souris susceptibles, une maladie persistante et démyélinisante en dépit de la réponse immunitaire. LA couche persistante DA exprime, contrairement à la souche neurovirulente GD7, la protéine 1*. Cette dernière facilite l’infection des macrophages, réservoir potentiel du virus lors de la persistance. L’action de cette protéine pourrait s’exercer par un effet antiapoptotique.
Des mutants cellulaires L929 devenus résistants à l’infection par le virus GD7 ont été obtenu dans notre laboratoire. Certains de ces mutants cellulaires (dont les lignées L929#25 et L929#34) présentent un profil d’interaction particulier par les différents virus. Il s’avère que la protéine 1* et la région de réplication (protéines 2A à 3B), outre la capside virale, influencent l’infection de ces mutants.
Nos avons montré que l’infection des macrophages est également facilitée par la présence de la protéine 1* et de la région 2A-3B du virus DA. Cela nous a poussé à caractériser d’avantage les mutants L929#25 et L929#34. Nous avons observé que la résistance de ces mutants intervient dans une étape très précoce du cycle viral (sans doute juste au moment ou après l’entrée du virus dans la cellule) et ne provient pas d’une augmentation de leur sensibilité à l’apoptose comme nous le pensions ? Nous avons construit et testé des virus recombinants pour tenter de mettre en évidence le facteur présent dans cette région 2A-3B qui favorise l’infection des macrophages et des mutants cellulaires.
Theilovirus --- Macrophages --- Infection
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Listeria monocytogenes is a facultative intracellular bacterium responsible for listeriosis. In humans, this disease is most common among pregnant women, newborns, and immunocompromised patients. Mortality is around 30%. The current treatment is based on the administration of b-lactams in association with an aminoglycoside but this treatment seems not completely adapted to intracellular forms. Indeed, b-lactams do not accumulate in eucaryotic cells and aminoglycosides accumulate in lysosomes whereas Listeria grow in the cytosol. Quinolones could be a good alternative because they (i) have a good intrinsic activity against Listeria (low MICs), (ii) accumulate in eucarotic cells, and (iii) are localized in the cytosol. For these reasons, we have studied four quinolones, ciprofloxacin, levofloxacin, moxifloxacin, and garenoxacin. First of all, we have characterised the pharmacodynamic properties of quinolones against extracellular Listeria monocytogenes. These results show that (i) quinolones are bactericidal against Listeria and (ii) the activity is concentration-dependent but also progresses over time. Thereafter, quinolone activity was mesured in infected THP-1 monocytes. These cells do not kill Listeria and are permissive to bacterial growth in the cytosol. Quinolones show a bactericidal activity against intracellular Listeria monocytogenes. Nevertheless, these activities are lower than these against extracellular forms (ciprofloxacin becomes even bacteriostatic) although quinolones accumulate 5 to 10 times in THP-1 cells. Finally, the intracellular activity of quinolones was studied in THP-1 cells activated by PMA (PMA activates PKC and differenciates monocytes in macrophages). In these conditions, ciprofloxacin and moxifloxacin activities are increased (350 and 170%, respectively) although these of levofloxacin and garenoxacin are not modified. This increase is coupled with enhanced accumulation (175 and 135%, respectively). The mechanism of this increase of accumulation is not known (we have not shown any effect of the PMA on a potential active transport of quinolones by either the adenin or cystein transporters) Listeria monocytogenes est une bactérie intracellulaire facultative responsable des listérioses. Les populations à risques comprennent les femmes enceintes et les personnes ayant une immunité diminuée. La mortalité des listérioses est élevée, de l’ordre de 30%. Le traitement actuel est basé sur l’administration de b-lactames en association avec un aminoglycoside mais il ne semble pas adapté face aux formes intracellulaires des Listeria monocytogenes. En effet, soit ces antibiotiques ne s’accumulent pas dans les cellules (b-lactames), soit ils s’accumulent dans les lysosomes (aminoglycosides) alors que les Listeria sont croissent dans le cytosol. Les quinolones pourraient être une bonne alternative car (i) ils ont une bonne activité intrinsèque vis-à-vis de Listeria (CMI basses), (ii) ils s’accumulent dans les cellules eucaryotes et (iii) ils sont localisés dans le même compartiment que ces bactéries. Pour ces raisons nous avons étudié quatre quinolones, la ciprofloxacine, la levofloxacine, la moxifloxacine et la garenoxacine. Nous avons, dans un premier temps, caractérisé les propriétés pharmacodynamiques des quinolones face aux Listeria monocytogenes extracellulaires. Ces résultats montrent que (i) les quinolones sont bactéricides face aux Listeria et (ii) l’activité est concentration-dépendante et augmente au cours du temps. Ensuite, l’activité des quinolones a été mesurée dans des monocytes THP-1 infectés par Listeria monocytogenes. Ces cellules ne sont pas capables de tuer les Listeria et son permissives à leur croissance. Les quinolones présentent une activité bactéricide face aux formes intracellulaires de Listeria. Cette activité est toutefois plus faible comparée à leur activité en bouillon (la ciprofloxacine devient bactériostatique) malgré que les quinolones étudiées s’accumulent entre 5 et 10 fois dans les THP-1. Enfin, l’activité intracellulaire des quinolones a été comparée à celle mesurée dans des THP-1 activées au PMA (un activateur de la PKC qui entraîne une différenciation des monocytes en macrophages). Dans ces conditions, l’activité de la ciprofloxacine et de la moxifloxacine est augmentée (respectivement 350 et 170% d’activité) alors que celle de la levofloxacine et le garenoxacine n’est pas modifiée. Cette augmentation est couplée avec une accumulation accrue de ces antibiotiques (respectivement 175 et 135% d'accumulation). Le mécanisme de cette augmentation d’accumulation n’est pas connu (nous n’avons pas montré d’effet du PMA sur un éventuel transport actif des quinolones par les transporteurs de l’adénine et de la cystéine)
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Mycobacterium --- Parasitology --- Macrophages
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MACROPHAGES --- LYMPHATIC SYSTEM --- RETICULOENDOTHELIAL SYSTEM --- MACROPHAGES --- LYMPHATIC SYSTEM --- RETICULOENDOTHELIAL SYSTEM
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Le laboratoire s'intéresse au rôle des lipides bioactifs dans l'inflammation. Dans le cadre de ce mémoire, nous allons particulièrement nous intéresser aux lysophosphatidylinositols (LPI) et à leur récepteur, le récepteur GPR55. En effet, lors d'études préliminaires, le laboratoire a observé une diminution de l'activation des macrophages induite par le lipopolysaccharide (LPS) en présence de LPI. Il nous a donc semblé intéressant de déterminer l'implication du récepteur GPR55 dans l'effet du LPI sur l'activation des macrophages, cellules qui jouent un rôle clé dans les réponses inflammatoires.L'inflammation est un processus biologique ayant pour rôle majeur la défense contre tous types d'agressions. Les monocytes sont parmi les premières cellules du système immunitaire recrutées sur le site de l'agression et vont se différencier en macrophages. Activés, les macrophages vont induire la production de cytokines mais également de médiateurs lipidiques (prostaglandines, leucotriènes,..) synthétisés à partir de l'acide arachidonique. Cet acide gras est libéré sous l'action de la phospholipase A2,entrainant également la libération du LPI. Ce lysophospholipide est l'agoniste endogène principal du GPR55, un récepteur couplé à une protéine G, récemment déorphanisé et considéré pendant un temps comme un récepteur cannabinoide. Par ailleurs, le GPR55 est impliqué dans le développement des tumeurs ainsi que dans la physiologie du système osseux.Pour pouvoir vérifier l'implication du GPR55 dans les effets du LPI, des cellules 1774 (lignée cellulaire de macrophages murins) pour lesquelles le LPI ne diminuait pas l'activation induite par le LPS, ont été transfectées avec un plasmide contenant la séquence codante du GPR55 humain. Après avoir vérifié l'expression du récepteur GPR55 humain dans les cellules transfectées, une sélection clonale a été effectuée.Les effets du LPI ainsi que d'autres ligands du GPR55 ont été testés sur les différents clones obtenus et activés par le LPS. Trois clones ont été sélectionnés pour la suite des études. La présence du récepteur en tant que protéine a été testée par ELISA. Dans les 3 clones, la protéine hGPR55 a pu être observée mais également dans les cellules 1774 sauvages. Le LPI ayant été décrit comme pouvant réguler la prolifération de cellules cancéreuses, nous avons également évalué son effet sur la prolifération cellulaire des cellules transfectées. De manière générale, le LPI induit une diminution de la prolifération cellulaire pour les clones testés. Et finalement, pour déterminer l'activation de la voie de signalisation du GPR55, nous avons vérifié l'activation du second messager ERK.1/2 par western-blet. Une augmentation de l'état phosphorylé est observée dans le clone 12 mais aucune modification en présence du LPI. L'effet du LPI a également été évalué dans des tissus de souris où l'inflammation a été induite par le LPS. Dans le foie, le cervelet et le poumon, le LPI n'induit aucune modification d'expression de cytokines pro-inflammatoires.En conclusion, nous avons mis en évidence une diminution de l'activation des macrophages par le LPI dans certains clones ainsi qu'un effet antiprolifératif du LPI sur ces macrophages. Des études supplémentaires sont requises afin de déterminer l'implication du GPR55 dans les effets du LPI, et le cas échéant déterminer quels récepteurs, si pas le GPR55, sont responsables de ces effets. The laboratory is interested in the raie of bioactive lipids in the inflammation. Inflammation is a biological process essential to hast defense. During inflammation monocytes are among the first cells of the immune system recruited and once in the tissue they differentiate into macrophages. Upon activation macrophages produce, among other mediators, cytokines and lipid mediators (prostaglandins, leukotrienes) derived from arachidonic acid. This fatty acid is released following the action of phospholipase A2, along with lysophosphatidy linositols (LPI). This lysophospholipid is the main endogenous agonist of GPRSS, a recently deorphanized G protein-coupled receptor. To date studies implicated GPRSS in the development of tumors as well as in bone remodeling. Within the framework of this report, we are particularly interested in LPI and the receptor GPRSS in the context of macrophage activation and of inflammation. lndeed, during preliminary studies, the laboratory observed a decrease of the lipopolysaccharide (LPS)-induced activation of a macrophage cell line (J774 cells) in the presence of LPI. Thus, it seemed interesting to determine the implication of GPRSS in the effect of LPI on macrophage activation, as there are key cells in the inflammatory processes. In order to verify the implication of GPRSS in the effects of LPI,J774 cells (a murine macrophage cell line) in which LPI did not decrease LPS-induced activation, were transfected with a plasmid containing the coding sequence of human GPRSS. After confirmat ion of the expression of the human GPRSS receptor in transfected cells, a clonai selection was made. The effects on LPS-induced cell activation of LPI,as well as other ligands of GPRSS, were tested in the various clones obtained. Based on the results, three clones were selected for further investigations. To this end we wanted to detect the protein expression of hGPRSS in these clones, as well as its activation by LPI.Because, LPI was reported to modulate cell proliferation, we also investigated its effects on the proliferation of the clones obtained. Generally, LPI decreased the proliferation of the tested clones.The effect of LPI was also investigated in tissues of mice with LPS-induced inflammation. ln the liver, the cerebellum and the lung, LPI did not affect the LPS-induced expression of pro-inflammatory cytokines.ln conclusion, LPI reduced LPS-induced macrophage activation in some clones and reduced cell proliferation. Further studies are necessary to determine if GPRSS is responsible for the observed effects of LPI,and if not, which receptor(s) are implicated.
GPR55 protein, human --- Lysophosphatidylinositol --- Macrophages
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Listeria monocytogenes is a facultative intracellular gram + bacterium who cause listeriosis. This disease hit preferentially pregnant women and immunocompromized patients and has a mortal rate of 25%. The macrophage is know to harbour L. monocytogenes and have a role in the propagation of the infection.
The standard treatment of this disease ( a -lactam combined with an aminoglycosid) is quite not appropriated because the -lactic don’t enter into the cells and the aminoglycosid don’t accumulate into the cytosol (the cellular compartiment where L. monocytogenes grow)
Quinolones will be a good alternative to this treatment because they accumulate into the cytosol and they have a low MIC against L. monocytogenes.
Animal studies haves shown the importance of the pro-inflammatory cytokines for the clearance of L. monocytogenes in particulars TNF- and IFN-. At the macrophages level IFN- induce production of superoxide and TNF- by those cells. Superoxide production is very important for clearance of L.monocytogenes by the macrophages and the TNF- has an autocrine action on macrophages activation by inducing superoxide production.
Glatiramer acetate is an immunomodulator who was first described in the study of allergic encephalomyelitis and was thereafter developed for the treatment of multiple sclerosis. While the exact mechanism of immunomodulation by glatiramer is not yet totally known, studies in vitro have shown that it block the secretion of TNF- from IFN--stimulated macrophages.
In virtue of this context we have investigated the possibility that the impairment of TNF- production by glatiramer increased the risk of macrophages infection by L.monocytogenes. Also we have studied the activity of glatiramer on Listeria’s quinolones susceptibility and on the quilonones intracellular activity. The result of our investigation show to us that (i) Glatiramer have not effect on quinolones activity against L. monocytogenes (ii)The impairment by the glatiramer of TNF- production in IFN--induced macrophages have not deleterious effect as far intracellular infection of macrophages by L. monocytogenes is concerned L.monocytogenes est une bactérie Gram+ intracellulaire facultative qui provoque une affliction appelée listeriose. Cette maladie atteint préférentiellement les femmes enceintes et les patients immunodéprimés et a un taux de mortalité de 25%. Les macrophages sont bien connus pour abriter ces bactéries et jouent un rôle dans leur propagation.
Le traitement standard des listerioses (un -lactam combiné à un amynoglycoside) est quelque peu mal adapté car les -lactams ne s’accumulent pas dans les cellules et les amynoglycosides ni dans le cytosol (compartiment cellulaire où les Listeria se multiplient)
Les quinolones pourraient être une bonne alternative au traitement actuel car elles s’accumulent beaucoup dans le cytosol et ont une CMI assez basse contre les L. monocytogenes.
Les études animales ont prouvé l’importance des cytokines pro- inflammatoire dans la lutte contre les listerioses (TNF- et IFN- notamment). Au niveau des macrophages L’IFN- induit la production de superoxide et de TNF-. La production de superoxide est cruciale pour que le macrophage élimine L. monocytogenes et le TNF- a une action autocrine sur l’activation des macrophages en induisant la production de superoxide.
L’acétate de glatiramère est un immunomodulateur qui fut d’abord décrit dans l’étude des encéphalomyélites allergiques puis qui fut développé afin de servir de traitement à la sclérose en plaques. Bien que le mécanisme exact de l’immuomodulation provoquée par le glatiramère n’est pas complètement élucidé, des études antérieures faites in vitro indiquent que l’acétate de glatiramère bloque la production de TNF- induite par l’IFN-.
En vertu de ce contexte, nous avons investigué la possibilité que la réduction de la production de TNF- par le glatiramère pouvait augmenter les risques d’infections des macrophages par L. monocytogenes. Nous avons aussi examiné si le glatiramère avait une action sur la sensibilité des L. monocytogenes aux quinolones et sur l’activité intracellulaire de celles-ci.
Nos résultats nous ont montré que (i) le glatiramère n’avait pas d’effet sur l’activité des quinolones contre L. monocytogenes (ii) que la diminution de la production de TNF- chez les macrophages stimulés à l’IFN- par l’acétate de glatiramère n’avait pas d’effet délétère du moins dans les limites de l’étude d’une infection de macrophages par L. monocytogenes
Listeria Monocytogenes --- Macrophages --- Immune System --- Acetates
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Obesity belongs to a cluster of metabolic abnormalities (insulin resistance, type 2 diabetes, hypertension, dyslipidemia and hypofibrinolysis) leasing to an increased risk for cardio-vascular disease. There related disorders are components of the Metabolic Syndrome. It has become clear from epidemiological studies that some increase in the adipose tissue mass antedates the development of other disorders.
Adipose tissue (adipose and stromal-vascular fractions) synthesize and release a variety of peptides which may have regulatory properties. I have studied one of these peptides: adiponectin (ApN) is mainly synthesized by mature adipocytes. This hormone has a protective role against atherosclerosis, enhances insulin sensitivity and fatty-acid oxidation. Plasma ApN levels are paradoxically decreased in obese subjects.
To understand this paradoxical decrease, I have studied ApN regulation in visceral fat of lean and obese subjects and examined the contribution of the different adipose tissue fractions to ApN secretion. I have also studied the regulation of ApN gen expression in a non-fat cell, target for the anti-atherogenic effect of ApN , the macrophage.
ApN secretion by visceral adipose explants is decreased in obese subjects. Data from co-cultures (adipocytes / stromal-vascular cells) and adipocyte cultures in conditioned media suggest that stromal-vascular cells may stimulate ApN secretion by adipocyte of lean subjects. However, adipocytes of obese individuals seemed to be resistant to this stimulation. A factor released by stromal-vascular cells could regulate ApN secretion by adipocytes.
We next studied ApN gene regulation in murine macrophages in vivo and in vitro. Intraperitoneal injection of LPS (lipopolyasacharide) to mice reduced plasma ApN levels, but increased ApN mRNA levels in the spleen, a representative organ of mononuclear-macrophage system. In vitro, combination of INF-γ with several cytokines increased ApN Mrna in cultured peritoneal macrophages, while these cytokines exert a well-known inhibitory effect on ApN expression in adipocytes.
In conclusion, a factor released by stromal-vascular cells may regulate ApN secretion in human visceral adipose tissue. Cytokines may induce ApN expression in macrophages, an effect opposite to that observed in adipose tissue L’obésité est un facteur de risqué important, voire crucial dans la pathogénie d’une constellation d’anomalies métaboliques (insulino-résistance, diabète de type 2, hypertension artérielle, dyslipémie et hypofibrinose,…) connu sous le nom de syndrome pluri métabolique. Le tissu adipeux, composé d’une fraction adipocytaire et d’une autre stromale-vasculaire, synthétise et sécrète un grand nombre de facteurs bioactifs, les adipocytokines. Ces dernières on un rôle potentiel dans la pathogénie de ce syndrome. Parmi les adipocytokines, l’adiponectine (ApN) est quasi exclusivement synthétisée par les adipocytes matures. Chez le sujet obèse, les taux circulants d’ApN sont diminués par rapport au sujet mince. Afin de comprendre cette diminution, a priori surprenante, nous avons étudié la régulation de l’ApN dans le tissu adipeux de sujets minces et obèses et examiné la contribution des différentes fractions de ce tissu à la sécrétion d’ApN. Nous avons élargi cette étude à la régulation de l’expression du gène ApN dans une cellule non-adipeuse, me macrophage.
Nous avons d’abord confirmé l’existence dans le plasma du monomère d’ApN 530 kDA) dans des conditions réductrices, ainsi que celle de complexes de plus haut poids moléculaire dans les conditions natives. In vitro, la sécrétion d’ApN par les explants de tissu adipeux viscéral est diminuée chez les sujets obèses. Nous avons mené des expériences de co-culture (adipocytes/ cellules stromales-vesculaires) ainsi que des cultures d’adipocytes en milieu conditionné par des cellules stromales-vasculaires. Les cellules stromales-vasculaires stimulerait la sécrétion d’ApN par les adypocytes de sujets minces. Par contre, les adipocytes de sujets obèses semblent résistants à cette stimulation. Il existerait donc un facteur libéré par la fraction stromale-vasculaire contrôlant la production d’ApN par les adipocytes.
Nous avons ensuite étudié la régulation de l’ApN dans les macrophages murins in vivo et in vitro. Chez la souris, le traitement au LPS (lipopolysaccharide) diminue les taux plasmatiques d’ApN lais par contre, augmente les taux d’ARNm ApN dans la rate, organe représentatif du système mononucléaire-macrophage. In vitro, l’association de plusieurs cytokines augmente les taux d’ArNm ApN dans des macrophages péritonéaux en culture, alors qu’elle exerce un effet inhibiteur bien connu sur l’expression de ce gène dans le tissu adipeux
Adipose Tissue --- Macrophages --- Blotting, Northern --- Blotting, Western
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