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Grâce au réarrangement somatique des gènes présents dans les cellules germinales (VDJ), les mammifères possèdent un répertoire immunitaire extrêmement large. De plus, des mutations somatiques modifient les régions variables des Ig et augmentent ainsi l’affinité, et accessoirement la spécificité, des anticorps. Nous avons abordé l’étude des mutations somatiques in vitro en recourant à deux modèles.
a)Des lymphocytes B naïfs (IgM membranaire positif et densité élevée) ont subi l’aide d’un clone lymphocytaire Th2 (CDC 35) spécifique des Ig de lapin en présence d’anticorps de lapin anti-IgM de souris utilisés sous forme de fragments F(ab) ‘ 2. b). Des lymphocytes B naïfs ont subi l’aide d’u clone lymphocytaire Th2 (MLS 4.2) via l’antigène MLS. Après quelques jours de culture, les lymphocytes B stimulés ont été fusionnées avec une cellule myélomateuse, SP2/O. L’analyse porte sur les exons, amplifiés à partir d’ADNc. Toutefois, pour éviter les difficultés d’interprétations (la détection d’une mutation suppose connue la séquence non mutée, or la moitié des Vh murins sont inconnus), nous avons amplifié les introns flanquant le réarrangement VDJ. Les introns, uniques dans le génome, sont en effet affectés par les mutations somatiques. Toute mutation devrait y être reconnue sans ambiguïté. L’ADN des hybrides a été digéré et les fragments comportant le réarrangement VDJ, ont été sélectionnés par « Southern blot ». Les produits d’amplification par PCR de ces fragments ont été directement séquencés. Aucune mutation n’a été décelée dans les exons Jh (546 pb) ni dans les introns (4285 pb) flanquant un réarrangement VDJ en 3’. Nous concluons que notre modèle d’activation somatique n’a pas produit une fréquence de mutations somatiques décelable, malgré un outil d’analyse performant, et qu’il faut donc élargir ou changer le système de stimulation in vitro.

Cloning, Molecular --- B-Lymphocytes --- T-Lymphocytes --- Medical Laboratory Science