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Darwin Information Typing Architecture.

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Delmée et al. ont établi l’existence d’un antigène spécifique de vingt et un groupe de C. difficile.
La technique d’agglutination sur lame ne permet cependant de distinguer que six sérogroupes.
Nous avons mis au point une méthode de typage rapide et permettant d’une part une distinction spécifique des vingt et un sérogroupes et d’autre par la détection rapide d’antigènes dans les selles.
C’est la méthode d’agglutination par comptage de particules (PACIA) que C. Cambiaso et P. Masson ont proposé en 1977 que nous avons employée.
Cette méthode permet de détecter les agglutinations d’antigènes libres avec des anticorps spécifiques. la lecture est électronique. La technique PACIA étant de spécificité équivalente aux autres méthodes immunochimiques (ELISA, RIA,..) a pour avantage sa sensibilité et sa rapidité.
Dans les limites de temps données, Nous avons entrepris la mise au point de réactifs latex spécifiques pour une première série de six sérogroupes A1, A8, C, F, H et K, choisis à cause de leurs implications épidémiologiques particulières :
- A1, c, H et K sont impliqués dans 75 % des cas de la CPM, forme de pathologie la plus grave que puisse causer le C . difficile.
- F est le sérogroupe toxigène retrouvé le plus souvent chez les enfants asymptomatiques.
Nous avons divisé ce travail en plusieurs parties :
1. Purification de l’antigène spécifique de sérogroupe
Après culture de 24 heures en milieu liquide, les antigènes ont été extraits du corps bactérien par l’acidification à ph 2, purifiés par des centrifugations successives à haute vitesse et concentrés par dialyse et lyophilisation.
La séparation des antigènes purifiés a été faites par PAGE. L’antigène spécifique de sérogroupe a été isolé par élution, puis lyophilisé et conservé à -20°C jusqu’à l’emploi.
2. Obtention d’antisérums monospécifiques
L’antigène spécifique a été re-suspendu dans du PBS et injecté aux lapins à raison d’une injection intradermique par semaine, six semaines de suite. La septième semaine le lapin a été saigné.
Titres finals et spécificités des antisérums ont été contrôlés par des méthodes immunochimiques (agglutination sur lame ou en microplaque, immunodiffusion d’Ouchterlony, immunotransfert ou préparation d’un latex adsorbé).
3. Mise au point d’un réactif covalent pour chaque antisérum groupe-spécifique.
La préparation des réactifs latex a consisté à purifier les IgG des antisérums spécifiques, digérer les IgG à la pepsine pour en préparer des F(ab-)2 purifier ces F(ab’)2 par filtration moléculaire et les couper covalement sur des billes de polystyrène.
Les conditions optimales d’usage des réactifs latex ont été définies. La charge en F(ab’)2 par 50 μl de latex vierge, l’emploi nécessaire ou non d’un adjuvant accélérateur des réactions AG-AC, le choix de la préparation antigénique, ont été des facteurs à déterminer ;
4. Applications des réactifs latex au sérogroupage de C. difficile et à la détection rapide d’antigènes dans les selles.
Une fois le réactif latex mis au point, nous avons essayé d’établir des protocoles pour un emploi spécifique du réactif dans les deux domaines :
le sérogroupage et la détention antigénique dans les selles.
Pour le sérogroupage de souches de C. difficile des distinctions parfaitement spécifiques ont été obtenues avec tous les latex lorsqu’on dilue l’échantillon 10-3 dans du PBS/BSA 1%.
Pour la détection dans les selles nous avons été confronté au problème d’interférences aspécifiques dues à la composition des matières fécales.
Différents traitements biochimiques nous ont permis de conclure à une nature protéique des interférences.
Pour éliminer ces interférences, nous avons mis au point et testé différents traitements, avant d’aboutir à un protocole qui nous a permis, pour le latex A1, la distinction parfaitement spécifique entre des extraits de selles du sérogroupe homologue A1, des extraits négatifs et des extraits positifs en C. difficile de sérogroupes hétérologues.
Ces résultats, tout en étant préliminaires, sont néanmoins encourageants, mais doivent encore être confirmés avec les autres sérogroupes

Clostridium difficile --- Typing, Bacterial --- Medical Laboratory Science

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FUNGI --- MYCOSES --- MYCOLOGICAL TYPING TECHNIQUES --- VETERINARY

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Histocompatibility testing --- Histocompatibility Testing --- Histocompatibility Testing. --- Histocompatibility typing --- Tissue typing (Transplantation) --- Immunological tolerance --- Tissues --- Crossmatching, Tissue --- HLA Typing --- Tissue Typing --- Crossmatchings, Tissue --- HLA Typings --- Histocompatibility Testings --- Testing, Histocompatibility --- Testings, Histocompatibility --- Tissue Crossmatching --- Tissue Crossmatchings --- Tissue Typings --- Typing, HLA --- Typing, Tissue --- Typings, HLA --- Typings, Tissue --- Genetics --- Transplantation --- Transplantation Immunology --- Analysis

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This invaluable book provides comprehensive coverage of contemporary serological, cellular and molecular methodologies in histocompatibility testing, and their application to human organ transplantation and transfusion. The contributors are internationally respected authorities in histocompatibility and immunogenetics, and are closely involved in the development or application of state-of-the-art technologies. The first three sections of the book are primarily intended for use as a bench manual for histocompatibility testers, immunologists and immunogeneticists; the fourth and fifth sections,

Histocompatibility testing. --- Immunological tolerance. --- Immune tolerance --- Tolerance, Immunological --- Immune response --- Immunology --- Histocompatibility --- Transplantation immunology --- Histocompatibility typing --- Tissue typing (Transplantation) --- Immunological tolerance --- Tissues --- Analysis