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Fructosamines are the molecules formed by the spontaneous and non-enzymatic reaction of glucose with a primary amine. When this reaction involves the amine function of a protein, the term glycation is used. Fructosamine-3-kinase (also called kétosamine-3-kinase-1) is an enzyme present in mammals that phosphorylates some of the fructosamine residues found in proteins. The fructosamine-3-phosphates formed this way are unstable and spontaneously decomposed in inorganic phosphate and 3-desoxyglucosone, with recovery of the initial amine. Thus, fructosamine-3-kinase is responsible of the deglycation process of proteins. This is also likely to be the case for kétosamine-3-kinase-2 (KN3K2), another mammalian enzyme, sharing 65% identity with fructosamine-3-kinase, able to phosphotylate psicosamines and ribulosamines, but not fructosamines.
The measurement of fructosamine-3-kinase activity in red blood cells of 60 individuals shows a large variability. This variability is in correlation with two polymorphisms found in the sequence of the gene encoding this enzyme. We wanted to see whether the gene encoding ketosamine-3-kinase-2 presents changes in its nucleotidic sequence that could be correlated with differences in enzyme activity.
We searched in the human gene of ketosamine-3-kinase-2 of the same 60 individuals using two different techniques: SSCP analysis and heteroduplex analysis. As a result we could show two nucleotidic changes that modify the encoded amine acids (K187R and V2281).
We expressed in Escherichia coli and purified both, the wild type ketosamine-3-kinase-2 and the two mutations found. In comparison to the wild type protein, we found that that mutated proteins do not show differences with respect to the phosphorylation capacity of lysozyme-allose, the affinity for the ATP, and thermal stability Les fructosamines sont des molécules formées par la condensation spontanée et non-enzymatique du glucose avec une amine primaire. Lorsque cette réaction implique la fonction amine d’une protéine, on utilise la terme de glycation. La fructosamine-3-kinase (encore appelée kétosamine-3-kinase-1) est une enzyme que l’on trouve chez les mammifères et qui phosphoryle certains résidus fructosamines des protéines. Les fructosamines-3-phosphates ainsi formés se détachent des protéines sous forme de phosphate inorganique et de 3-desoxyglucosone, avec restauration de l’amine de départ. La fructosamine-3-kinase est ainsi responsable d’un processus de déglycation de protéines. Il en va vraisemblablement de même pour la kétosamine-3-kinase-2 (KN3K2), autre enzyme que l’on trouve chez les mammifères qui partage 65% d’identités avec la fructosamine-3-kinase, et qui phosphoryle, non des fructosamines, mais des psicosamines et des ribulosamines.
Le dosage de l’activité fructosamine-3-kinase dans les globules rouges de 60 individus montre une grande variabilité interindividuelle. Cette variabilité est en bonne corrélation avec deux polymorphismes qui ont été mis en évidence au niveau du gène codant cette enzyme. Nous avons voulu voir si le gène de la kétosamine-3-kinase-2 présentait aussi des changements au niveau de sa séquence nucléotidique qui pourraient être corrélés avec des différences d’activité.
Nous avons cherché des mutations dans le gène humain de la kétosamine-3-kinase-2 des mêmes 60 individus par deux techniques différentes : l’analyse par SSCP et l’analyse des hétéroduplex. Cette recherche nous a permis de mettre en évidence deux changements au niveau de la séquence nucléotidique qui changent tous les deux les acides aminés encodés (K184R et V228I).
Nous avons exprimé chez Escherichia coli et purifié la kétosamine-3-kinase-2 sauvage et les deux protéines porteuses des mutations trouvées. Comparativement à la protéine sauvage, nous avons vu que les deux protéines mutées ne présentent pas de différences an ce qui concerne la capacité de phosphoryler le lysozymz-allose, l’affinité pour l’ATP et la stabilité thermique

Mutation

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plants --- mutation. --- mutation

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Plant breeding --- mutation. --- mutation --- Induced mutation

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Plantes --- Mutation

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Mutation sociale