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2009 (1)

2006 (1)

2004 (1)

2000 (1)

1999 (1)

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Book
Du couplage multiple des récepteurs cannabinoïdes : mise en évidence par le modèle de gène-rapporteur de la luciférase
Authors: --- ---
Year: 2004 Publisher: Bruxelles: UCL. Faculté de pharmacie et des sciences biomédicales,

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Abstract


Book
Promoteurs peau-spécifiques pour une immunisation par électrotransfert d'ADN
Authors: --- --- ---
Year: 2009 Publisher: Bruxelles: UCL. Faculté de pharmacie et des sciences biomédicales,

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Abstract

G-protein-coupled receptors (GPCRs) comprise a wide family of monomeric heptahelical glycoproteins that recognize a broad array of extracellular mediators (including cationic amines, lipids, peptides, proteins, and sensory agents).GPCRs are considered , as a dogme, like a membranous entity.However,some evidence has suggested ,the existence of an intracellular/nuclear GPCRs population (e.g. the lysophosphatidic acid receptor or also the parathormon receptor). In this study, by mean of a complementar and multidisciplinar approches, we demonstrated that B2R are located in highly purified nuclei from isolated rat hepatocytes.These nuclear receptors recognize the specific ligands of membranous receptor such as bradykinin (BK) and Hoetch 140 (HOE 140 ou icatibant). The results depicting B2R nuclear expression in isolated nuclear organelles were reproduced in situ on hepatic sections by immunogold labeling and transmission electron microscopy ; this prooving that first observation related in isolated nuclei were not an artefactual redistribution of the receptor due to cellular fractionning. Functional tests on single nucleus, by means of confocal microscopy and the calcium-sensitive probe fluo-4, showed that BK induces concentration-dependent transitory mobilization of nucleoplasmic calcium; these responses were blocked by B2R antagonist HOE 140, not by the BIR antagonist R954 and, were also found in wild-type C57/Bl6 mice, but not in B2R-KO mice.The existent scientific literature on the nuclear GPCRs signalling has been defined, in most cases, on primary cells and transfected cells, cultivated in vitro. Our results describe a new atypical nuclear localisation of RCPGs for peptidic ligand, specifically for rB2 ; and also, for the first time, the functionality of this type of receptors. By considering the participation well-established of the kallicréines / kinines system in inflammatory (e.g. trauma, infection ...), it would be interesting to determine the inter-relationship of signalling of rB2 membranaires with their nuclear counterparts. Finally, functions and potential involvements of these nuclear RCPGs, in physiology and in physiopatholog y, remain to be clarified but will be certainly very promising. Les récepteurs couplés à des protéines-G (RCPGs) comportent une large famille de protéines considérées comme entités des membranes plasmiques . Cependant, des études récentes suggèrent qu'ils puissent également se localiser au niveau des membranes nucléaires (ex. récepteurs des phospholipides, de l'endothéline et de la parathormone). Dans cette étude, en utilisant une approche pluridisciplinaire (microscopie confocale, électronique ainsi que l' immunobuvardage de type western), nous avons montré que les noyaux isolés à partir de foies de rats, expriment le récepteur B2 (rB2) qui reconnaît ses ligands spécifiques, tels la bradykinine (BK) et le HOE-140 (Icatibant). Ces résultats ont été reproduits sur des sections de tissus hépatiques intactes, par microscopie électronique en transmission, indiquant que la localisation nucléaire des rB2 n'est pas due à une redistribution artéfactuelle apparaissant lors du fractionnement cellulaire. De plus, nous avons détecté le kininogène de haut poids moléculaire (KHPM), précurseur de la BK, dans le compartiment nucléaire, suggérant qu'il existe une source de ligand disponible au sein du noyau. Nos essais fonctionnels, grâce à la microscopie confocale et à la sonde calcique, le fluo-4, ont montré que la BK induit une augmentation transitoire du calcium nucléoplasmique. Cette réponse calcique a été bloquée par l'antagoniste 82 HOE-140 et non par l'antagoniste B 1 R-954, et a été retrouvée également dans les noyaux d'hépatocytes des souris C57/Bl6 type sauvage, mais pas dans ceux des souris KO-B2 . La littérature scientifique existante sur la signalisation de RCPGs nucléaires a été principalement définie sur des cellules primaires et transfectées, cultivées in vitro. Nos résultats décrivent une nouvelle destination atypique des RCPGs pour les ligands de nature peptidique, spécifiquement pour les rB2, aux noyaux de tissus ; mais aussi, pour la première fois, la fonctionnalité de ce type de récepteurs. En considérant la participation bien établie du système kallicréines/kinines dans des désordres inflammatoires (ex. le trauma, l'infection), il serait intéressant de déterminer l'interdépendance de la signalisation des rB2 membranaires avec leurs homologues nucléaires. Enfin, les fonctions et implications potentielles de ces RCPGs nucléaires, en physiologie et en physiopathologie, restent à être élucidées mais seront certainement très prometteuses.


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Caractérisation du promoteur du gène de la glomuline

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Abstract

The glomulin gene was recently identified in the laboratory where this work was done. Mutations in this gene are known to cause hereditary glomuvenous malformations. Previous studies have shown that glomulin could play a role in the differentiation of vascular smooth muscle cells. However, its exact function remains unknown.
In order to better understand the spatio-temporal expression of glomulin, that are conserved between different species. We also predicted a minimal promoter of 548 bp. The most interesting regions were cloned either upstream or downstream of a luciferase reporter gene, which allowed to measure their transcriptional activity in different cell types. Cells expressing glomulin endogenously were chosen as target, since they are more likely to have the appropriate transcription factors. Detailed analysis of the most important regions allowed us to identify some transcriptional factors potentially involved in the regulation of glomulin expression. In order to study this expression in vivo; we also created transgenic mice. LacZ reporter gene was cloned downstream of a 5 kb fragment of promoter, in frame with the ATG of glomulin. Assuming that this fragment is sufficient, it should reveal the expression profile of glomulin in mouse Le gène de la glomuline, dont les mutations causent les malformations glomuveineuses héréditaires, fût récemment identifié par le laboratoire au sein duquel ce travail a été réalisé. Des études antérieures ont démontré que la glomuline pourrait jouer un rôle dans la différenciation des cellules musculaires lisses vasculaires. Cependant, sa fonction exacte reste encore peu connue. Afin de mieux comprendre l’expression spatio-temporelle de la glomuline, il est donc nécessaire de caractériser la région promotrice du gène et de localiser les divers éléments régulateurs.
L’utilisation de plusieurs outils bio-informatiques nous a permis de mettre en évidence des régions du gène de la glomuline conservées entre différentes espèces ainsi que de prédire une région promotrice minimale de 548 pb. Les régions les plus intéressantes ont été clonées de part et d’autre d’un gène rapporteur, la luciférase, qui permet d’en mesurer l’activité transcriptionnelle dans plusieurs types cellulaires différents. Des cellules cibles exprimant naturellement la glomuline ont été choisies afin d’augmenter la probabilité qu’elles aient les facteurs de transcription adéquats. Une analyse approfondie des régions les plus importantes a permis d’identifier quelques facteurs de transcription potentiellement impliqués dans la régulation transcriptionnelle du gène de la glomuline. Afin d’étudier l’expression de la glomuline in vivo, nous avons également entamé la création de souris transgéniques. Le gène rapporteur LacZ, cloné en aval de 5 kb de région promotrice est en phase au niveau de l’ATG de la glomuline, devrait en révéler le profil d’expression, pour autant que ce fragment soit suffisant


Dissertation
A luciferase model to study Hsp70 en Hsp40 chaperones in mammalian cells
Authors: ---
ISBN: 9036710979 Year: 1999

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Abstract

Bioluminescence and chemiluminescence. Part C
Authors: ---
ISBN: 0121819574 0121820335 0121822060 9786611010935 1281010936 0080496644 9780121820336 9780121819576 9780121822064 Year: 2000 Volume: 57 Publisher: San Diego: Academic press,

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Abstract

Since the publication of Bioluminescence and Chemiluminescence, Part B, genes have been cloned that encode luciferases from an array of bioluminescent organisms, novel applications of these genes have been developed, and much has been learned of the fundamental chemistry, biochemistry, structural biology, and biophysics of these intriguing enzymes. New strategies for application of chemiluminescence technology have been developed and refined, promising to further reduce the need to use radioisotopes in basic research and clinical laboratory settings. Methods for detection of low levels

Keywords

Biological techniques --- Enzymology --- General biophysics --- Chemiluminescence --- Bioluminescence --- Luminescence --- Luciferases --- metabolism --- 577.15 --- Luminescent Measurements. --- Chemoluminescence --- Animal light --- Animal luminescence --- Light production in organisms --- Photobiology --- Bioluminescence Measurements --- Bioluminescent Assays --- Bioluminescent Measurements --- Chemiluminescence Measurements --- Chemiluminescent Assays --- Chemiluminescent Measurements --- Chemoluminescence Measurements --- Luminescence Measurements --- Luminescent Assays --- Luminescent Techniques --- Phosphorescence Measurements --- Phosphorescent Assays --- Phosphorescent Measurements --- Assay, Bioluminescent --- Assay, Chemiluminescent --- Assay, Luminescent --- Assay, Phosphorescent --- Assays, Bioluminescent --- Assays, Chemiluminescent --- Assays, Luminescent --- Assays, Phosphorescent --- Bioluminescence Measurement --- Bioluminescent Assay --- Bioluminescent Measurement --- Chemiluminescence Measurement --- Chemiluminescent Assay --- Chemiluminescent Measurement --- Chemoluminescence Measurement --- Luminescence Measurement --- Luminescent Assay --- Luminescent Measurement --- Luminescent Technique --- Measurement, Bioluminescence --- Measurement, Bioluminescent --- Measurement, Chemiluminescence --- Measurement, Chemiluminescent --- Measurement, Chemoluminescence --- Measurement, Luminescence --- Measurement, Luminescent --- Measurement, Phosphorescence --- Measurement, Phosphorescent --- Measurements, Bioluminescence --- Measurements, Bioluminescent --- Measurements, Chemiluminescence --- Measurements, Chemiluminescent --- Measurements, Chemoluminescence --- Measurements, Luminescence --- Measurements, Luminescent --- Measurements, Phosphorescence --- Measurements, Phosphorescent --- Phosphorescence Measurement --- Phosphorescent Assay --- Phosphorescent Measurement --- Technique, Luminescent --- Techniques, Luminescent --- Light --- Enzymes. Catalysts of biological reactions. Enzymology --- metabolism. --- Bioluminescence. --- Chemiluminescence. --- LUCIFERASE --- Luminescence. --- 577.15 Enzymes. Catalysts of biological reactions. Enzymology --- Luciferase --- Metabolism. --- Luminescent Measurements --- Chemiluminescentie. --- Chimioluminescence. --- Bioluminescentie. --- Luciferases - metabolism

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