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Le diagnostic de la paratuberculose est gêné par le manque de sensibilité et de spécificité des tests immunologiques disponibles jusqu’à présent. En effet, ils permettent difficilement d’identifier les animaux infectés par Mycobacterium paratuberculosis en raison des nombreuses réactions croisées avec les autres espèces mycobactériennes.
Nous avons analysés, dans ce travail, les protéines antigéniques de Mycobacterium paratuberculosis afin d’y mettre en évidence des constituants intéressants pour la mise au point d’un test sérologiques spécifiques et sensible pour la paratuberculose bovine. Une quarantaine de protéines, situées dans une région allant de 18 à 75 KDa, ont été identifiées à l’aide d’un sérum de lapin hyperimmunisé contre Mycobacterium paratuberculosis : les composants les plus antigéniques sont situés dans la région allant de 25 à 40 KDa. Des résultats analogues ont été obtenus à l’aide de sérums de bovins paratuberculeux. La région allant de 25 à 40 KDa est particulièrement bien reconnus par les sérums d’animaux paratuberculeux et cela à différents stades de la maladie.
Nous avons montré que toutes les protéines, d’un poids moléculaire supérieur à 40 KDa, reconnues par les bovins paratuberculeux possèdent des épitopes communs avec Escherichia Coli et que la plupart des protéines antigéniques de Mycobacterium paratuberculosis possèdent des épitopes communs avec Mycobacterium avium, Mycobacterium bovis et Mycobacterium phlei. Seule une protéine de 18 KDa semble être entièrement spécifique à Mycobacterium paratuberculosis.
Comme la croissance de Mycobacterium paratuberculosis est lente, la purification des protéines antigéniques que nous avons identifiées est difficilement réalisable à partir de culture de la bactérie. Elles ont, de ce fait, été produites par génie génétique. Nous avons caractérisé neuf polypeptides recombinants antigéniques de Mycobacterium paratuberculosis isolés préalablement à ce travail après criblage d’une banque génomique de Mycobacterium paratuberculosis dans le vecteur λgt11. Nous avons déterminé leurs tailles et montrés que trois d’entre eux (A361, A362 et A363) correspondant à une protéine de 34 KDa du complexe antigénique A36. Les autres (A2, A4, A5, A6 et A7) correspondent à des protéines ne faisant pas partie de ce complexe. Les polypeptides recombinants A4 et A6 semblent être constitués uniquement d’épitopes conformationnels. Les polypeptides mycobactéries produits par les phages A2 et A362 sont spécifiques à Mycobacterium paratuberculosis vis-à-vis des autres espèces mycobactériennes et sont bien reconnus par des sérums de bovins paratuberculeux. Finalement, nous avons réalisé les premières étapes de mise au point d’un test ELISA spécifique pour la paratuberculose bovine à l’aide du polypeptide recombinant A362.

Paratuberculosis --- Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis --- Immunologic Techniques --- Medical Laboratory Science