TY - THES ID - 139026252 TI - Functionele karakterisatie van SWIB-5, een nieuwe bladgroeiregulator van Arabidopsis thaliana. AU - Stevens, Evelyne AU - Van Houdt, L. AU - KAHO Sint-Lieven. Technologiecampus Gent PY - 2014 PB - Gent KAHO Sint-Lieven DB - UniCat UR - https://www.unicat.be/uniCat?func=search&query=sysid:139026252 AB - Tijdens deze stage werd onderzoek gedaan naar een nieuwe bladgroeiregulator bij Arabidopsis thaliana. Hiervoor werd SWIB-5, een eiwit geïdentificeerd in het celcyclus interactoom, gekarakteriseerd. Deze functionele karakterisatie werd uitgevoerd met behulp van een overexpressie-mutant (OE) en twee “loss of function”-mutanten (LOF) die vergeleken werden met hun wild-type (WT). De functionele karakterisatie omvatte de fenotypische analyse en de moleculaire analyse. Bij de fenotypische analyse werd er een cellulaire analyse uitgevoerd onder controle omstandigheden hieruit bleek dat SWIB-5 mogelijks een invloed heeft op het aantal cellen van de bladprimordia wat een invloed heeft op de bladgroei. Vervolgens werd ook de bladgroei bestudeerd onder milde stress condities. Waaruit kan gesuggereerd worden dat SWIB-5 mogelijk een invloed heeft op productie van zuurstofradicalen. Ook werd het wortelfenotype geanalyseerd d.m.v. een groeiexperiment. De knock-out mutant had een veel kleinere wortel met een hogere zijworteldensiteit. Een mogelijke verklaring hiervoor is dat de knock-out mutant vroeger de celproliferatie stopt en als compensatie meer zijwortels vormt.Bij de moleculaire analyse werden experimenten uitgevoerd om de eiwitlokalisatie van SWIB-5 na te gegaan. Dit gebeurde door eerst het blad van een tabaksplant te infecteren en dan een colocalisatie uit te voeren met de confocale microscoop. Hieruit bleek dat SWIB-5 mogelijk in de mitochondriën tot expressie komt.Een volgend experiment was de invloed van SWIB-5 op de genexpressie van een aantal genen die een rol spelen tijdens de ontwikkeling van Arabidopsis thaliana na te gaan. De geobserveerde verschillen in expressie suggereren dat SWIB-5 geen directe invloed heeft op de onderzochte genen, maar dat de OE-mutant een andere ontwikkelingsstatus heeft dan het wild-type.Tenslotte werd er geprobeerd om interacties van SWIB-5 met andere eiwitten te achterhalen, hiervoor werden er constructen gemaakt via MultiSite Gateway® kloneren die dan gebruikt werden voor Tandem Affinity Purification (TAP).De functionele karakterisatie van een nieuwe bladgroeiregulator (SWIB-5) is nog niet afgerond. Er zijn nog vele onzekerheden die nog bevestigd moeten worden. Hopelijk levert het TAP-experiment enkele eiwitinteracties op. ER -