TY - THES ID - 138543172 TI - Improvement of liquid chromatographic methods for the analysis of selected antibiotics and mass spectrometric investigation of unknown impurities. AU - Diana Di Mavungu, Jose AU - Adams, Erwin. AU - Van Aerschot, Arthur. AU - Verbruggen, Alfons. AU - Chiap, Patrice AU - Van Schepdael, Ann. AU - Hoogmartens, Jos. AU - K.U.Leuven. Faculteit Farmaceutische wetenschappen. PY - 2005 PB - Leuven K.U.Leuven. Faculteit Farmaceutische wetenschappen DB - UniCat UR - https://www.unicat.be/uniCat?func=search&query=sysid:138543172 AB - De ontwikkeling van kwalitatieve en kwantitatieve analysemethoden voor geneesmiddelen is zeer belangrijk daar alle bestanddelen in een geneesmiddel moeten geïdentificeerd en gekwantificeerd worden vanaf een bepaalde drempel. Het doel van dit werk was dan ook de ontwikkeling van betere vloeistofchromatografische (LC) methoden voor de analyse van een aantal geselecteerde antibiotica. Er werd een LC methode ontwikkeld voor de analyse van tetracycline waarbij het mogelijk werd om tetracycline te scheiden van 12 verwante verbindingen met gekende identiteit en 3 onbekende onzuiverheden. Hiervoor werd gebruik gemaakt van een omgekeerde fase kolom, XTerra RP18 (5 µm, 250 x 4.6 mm I.D.), en een mobiele fase samengesteld uit acetonitrile, tetrabutylammonium hydrogen sulfaat (TBA), ethylenediamine tetraacetaat (EDTA), en water. Aan de hand van deze resultaten werden verbeterde LC methodes voor oxytetracycline, doxycycline, minocycline en chloortetracycline ontwikkeld. Een verbeterde LC methode werd ook ontwikkeld voor de analyse van vancomycine met een Kromasil C18 (5 µm, 250 x 4.6 mm I.D.) kolom en een mobiele fase samengesteld uit dioxaan, ammoniumformiaat, buffer en water. Met deze methode kon de hoofdcomponent vancomycine B gescheiden worden van 8 verwante verbindingen met gekende identiteit en 12 onbekende onzuiverheden. Deze laatsten werden onderzocht met massaspectrometrie. Zes onbekende onzuiverheden konden geïdentificeerd worden, m.n. demethylleucylvancomycine B, vancomycine B-26-methyl ester, desamidovancomycine B, N-demethylvancomycine B, N-methylvancomycine B en 20-chlorovancomycine B. Dirithromycine kon gescheiden worden van 3 verwante verbindingen met gekende identiteit en 12 onbekende onzuiverheden gebruik makende van een Zorbax Extend C18 (5 µm, 250 x 4.6 mm I.D.) kolom en een mobiele fase samengesteld uit acetonitril, methanol, 2-propanol, kaliumfosfaatbuffer en water. De onbekende onzuiverheden werdenonderzocht met massaspectrometrie. De identiteit van 9 onbekenden kon bepaald worden, waaronder 3 verschillende dirithromycine analogen waarbij de zijketen op de oxazine ring gemodifieerd is. Twee onzuiverheden vertoonden een verschillende alkylgroep op positie C13. In twee andere onzuiverheden was de aminogroep van de desosaminesuiker gemethyleerd. Eén onzuiverheid werd geïdentificeerd als dirithromycine F en een andere als dirithromycine N -oxide. Voor de analyse vangentamicine en neomycine werden ook LC methoden ontwikkeld. Hierbij werd gebruik gemaakt van gepulseerde elektrochemische detectie. De hoofdcomponenten werden gescheiden van hun onzuiverheden op omgekeerde silicagel kolommen. De mobiele fasen waren samengesteld uit natriumsulfaat, natrium-1-octaansulfonaat, fosfaatbuffer, tetrahydrofuraan en water. Men kan dus besluiten dat verbeterde LC methoden ontwikkeld werden voor de analyse van verschillende antibiotica. Deze methoden zijn robuust en vertonen een goede selectiviteit, herhaalbaarheid, lineariteit en gevoeligheid. Het gebruik van massaspectrometrie liet toe om de identiteit van de onzuiverheden te bevestigen en nieuwe bestanddelen on-line te identificeren. The main aim of this work was to develop better liquid chromatographic (LC) methods for the analysis of selected antibiotics. Tetracycline was separated from 12 related substances of known identity and from 3 unknown impurities on an XTerra RP18 (5 µm, 250 x 4.6mm I.D.) stationary phase, with a mobile phase containing acetonitrile, tetrabutylammonium hydrogen sulphate (TBA), ethylenediamine tetraacetate (EDTA) and water. Based on the experience obtained with tetracycline, improved LC methods were also developed for oxytetracycline, doxycycline, minocycline and chlortetracycline. An improved LC method was developed for vancomycin using a Kromasil C18 (5 µm, 250 x 4.6 mm I.D.) column and a mobile phase containing dioxane, ammonium formate buffer and water. The method allowed to separate the main component vancomycin B from 8 related substances of known identity and from 12 unknown impurities. The unknown impurities were investigated by coupling LC to mass spectrometry (MS). The structures of six substances were elucidated. These substances were identified as demethylleucylvancomycin B, vancomycin B-26-methyl ester, desamidovancomycin B, N-demethylvancomycin B, N-methylvancomycin B and 20-chlorovancomycin B. Dirithromycin was separated from 3 related substances of known identity and from 12 unknown impurities on a Zorbax Extend C18 (5 µm, 250 x 4.6 mm I.D.) column, using a mobile phase containing acetonitrile, methanol, 2-propanol, potassium phosphate buffer andwater. The unknown impurities were investigated by LC/MS. In total, nine impurities were identified, among which three different dirithromycin analogues with a modification in the side chain on the oxazine ring. Two impurities showed a different alkyl group in position C13. In two impurities the desosamine sugar was involved with changes in the degrees of methylation of the amino group. One unknown was identified as dirithromycin F and another unknown was characterized as dirithromycin N-oxide. Improved LC methods were also developed for the analysis of gentamicin and of neomycin with pulsed electrochemical detection. The major components were separated from their impurities on silica-based reversed stationary phases with mobile phases containing variable amounts of sodium sulphate, sodium 1-octanesulfonate, phosphate buffer, tetrahydrofuran and water. It can be concluded that improved LC methods were developed for the analysis of different antibiotics. These methods proved to be robust, selective, repeatable, linear and sensitive. The hyphenation of LC and MS allowed enhanced confirmation of identity and on-line identification of novel substances. ER -