TY - BOOK ID - 127191679 TI - Étude du rôle de microARNs activés par l'hypométhylation de l'ADN dans les tumeurs AU - Van Eynden, Michel AU - De Smet, Charles AU - UCL.. FASB - Faculté de pharmacie et des sciences biomédicales PY - 2015 PB - Bruxelles: UCL. Faculté de pharmacie et des sciences biomédicales, DB - UniCat KW - MicroRNAs KW - DNA Methylation KW - Neoplasms UR - https://www.unicat.be/uniCat?func=search&query=sysid:127191679 AB - DNA methylation is an epigenetic modification associated with transcriptional repression. Losses of DNA methylation (hypomethylation) in tumors lead to aberrant activation of a particular group of genes, whose expression is normally restricted to the germ line. A crucial question is whether some of these genes, termed "cancer-germline" (CG), exert pro-tumoral activities.The laboratory has recently identified a new CG gène, CT-GABRA3, which hosts a pair of microRNAs (miRNA-105 and miRNA-767). Another recent study demonstrated that miRNA-105, which is secreted via exosomes, exerts a pro-metastatic activity by its ability to destabilize endothelial barriers following down-regulation of tight junction protein TJPl. Moreover, the laboratory has shown that miRNA-767 inhibits expression of a tumor suppressor gene, TET1. TET enzymes are involved in DNA demethylation processes, via conversion of 5-methylcytosines (5mC) to 5-hydoxymethylcytosines (5hmC). Activation of miRNA-767 may therefore have epigenetic consequences in the tumor genome. The main objective of the laboratory is to better characterize the role of miRNA-105 and miRNA-767 in tumor development, and in particular to determine whether these two miRNAs have synergistic activities. In this context, our goal was to establish cellular models allowing individual or combined induction of the two miRNAs. Lentiviral vectors containing the sequence of miRNA-105 and/or miRNA-767, preceded by a doxycycline-inducible promoter, were transduced into the HEK293 cell line, which does not initially express these miRNAs. Clones from these transductions were derived and were subjected to analyses aiming to verify: i) absence of expression of one or both miRNA before induction; ii) expression after induction; iii) the effect of their induction on the expression of target genes (TJPl for miRNA-105 and miRNA-767 for TETl). We were able to select clones in which miRNA-105 or miRNA-767 show specific expression after induction, and is accompanied by down-regulation of the corresponding target gene. These clones were used to analyze the effect of each miRNA on cell proliferation and migration. No effect of the miRNAs was observed on cell migration. In contrast, induction of miRNA- 767 appeared to be associated with decreased cell proliferation. Finally, we confirmed the effect of miRNA-767 on the overall level of 5hmC. In conclusion, we were able to establish cellular models, which will permit analysis of the cellular roles of miRNA-105 and miRNA-767. A cellular model allowing combined induction of the two mi RNAs is currently under selection. La méthylation de l'ADN est une modification épigénétique associée à la répression transcriptionnelle. Des pertes de méthylation de l'ADN (hypométhylation) dans les tumeurs conduisent à l'activation aberrante d'un groupe particulier de gènes dont l'expression est normalement restreinte à la lignée germinale. Une question cruciale est de savoir si certains de ces gènes, appelés "cancer-germline" (CG), exercent une activité pro-tumorale. Le laboratoire a récemment identifié un nouveau gène CG, CT-GABRA3, qui héberge une paire de microARNs (miRNA-105 et miR NA-767). Une étude très récente a démontré que miR NA-105, qui est sécrété via des exosomes, exerce une activité pro-métastatique de par sa capacité à déstabiliser les barrières endothéliales en y inhibant l'expression d'une protéine de jonction serrée (TJPl). Par ailleurs, le laboratoire a montré que miRNA-767 inhibe l'expression d'un gène suppresseur de tumeur, TET1. Les enzymes TET sont impliquées dans des processus de déméthylation de l’ADN, via la conversion de 5-methylcytosines (5mC)en 5-hydoxymethylcytosines (5hmC). L'activation de miRNA-767 pourrait donc avoir des répercussions épigénétiques dans le génome de la tumeur. L'objectif principal du laboratoire est de mieux caractériser le rôle des mi RNA-105 et miR NA-767 dans le développement des tumeurs, et en particulier, de déterminer si ces deux miRNAs ont des activités synergiques. Dans ce cadre, notre but était d'établir des modèles cellulaires permettant l'induction isolée ou combinée des deux miRNAs. Des vecteurs lentiviraux contenant la séquence de miRNA-105 et/ou mi RNA-767, précédée d'un promoteur inductible à la doxycycline ont été transduits dans la lignée HEK293, qui n'exprime initialement pas ces miRNAs. Des clones issus de ces transductions ont été dérivés et ont été soumis à des analyses destinées à vérifier : i) l'absence d'expression du/des miR NA avant induction ; ii) leur expression après induction ; iii) l'effet de leur induction sur l'expression de gènes cibles (TJPl pour mi RNA-105, TETl pour miRNA-767).Nous avons ainsi pu sélectionner des clones dans lesquels l'expression de mi RNA-105 ou miR NA-767 apparaît spécifiquement après induction, et s'accompagne de la sous-expression du gène cible correspondant. Ces clones ont été utilisés pour analyser l'effet des miR NAs sur la prolifération et la migration cellulaires. Aucun effet des miR NAs n'a été observé sur la migration cellulaire. Par contre, l'induction de miRNA-767 semble associée à une diminution de prolifération cellulaire. Enfin, nous avons confirmé l'effet de miRNA-767 sur le niveau global de 5hmC. En conclusion, nous avons pu établir des modèles cellulaires qui permettront d'analyser le rôle de miRNA-105 et du miRNA-767 isolément. Un modèle cellulaire permettant l'induction combinée des deux miRNAs est en cours de sélection. ER -