TY - BOOK ID - 126748673 TI - Etude de la localisation subcellulaire de la protéine L* du virus de Theiler AU - Sorgeloos, Frédéric AU - Michiels, Thomas AU - UCL.. MD/MIGE/MIPA - Unité de pathogénie microbienne PY - 2004 PB - Bruxelles: UCL, DB - UniCat KW - Theilovirus UR - https://www.unicat.be/uniCat?func=search&query=sysid:126748673 AB - Theiler’s virus is a murine neurotropic virus which belongs to the Picornaviridae family. Persistent strains of this virus can produce a lifelong infection of the spinal cord, in spite of a strong immune response directed against the virus. Persistence of the virus in the spinal cord white matter induces a demyelinating disease reminiscent of human multiple sclerosis. <BR> The L* protein expressed by Theiler’s virus is an important persistence determinant. This protein is encoded by an alternative open reading frame overlapping the main reading frame of the viral genome. <BR> The aim of the present work was to precise the subcellular localization of protein L* , and to identify the corresponding targeting signals on the protein. <BR> Therefore, we used confocal microscopy to analyse the subcellular distribution of the L* protein expressed by DA1 virus, or of a plasmid-encoded EGFP- L* fusion protein. <BR> Our results show that L* colocalizes with mitochondria. This localization contrasts with the formerly reported association of L* with microtubules. <BR> These results also suggest a link between L* protein expression and cellular apoptosis.<BR> We then constructed a series of EGFP- L* deletion mutants to identify the mitochondria targeting signal(s) within L*. We observed that, except for a small C-terminal portion of the protein, any deletion introduced in L* prevented association of the fusion protein with mitochondria, suggesting that the targeting signal is conformational Le virus de Theiler est un virus neurotrope appartenant à la famille Picornaviridae. Les souches persistantes du virus ont la capacité de persister au niveau de la substance blanche de la moelle épinière. Cette persistance virale est accompagnée de lésions de démyélinisation semblables à celles retrouvées chez les malades souffrant de la sclérose en plaques. Parmi les éléments déterminant cette persistance virale, la protéine L* joue un rôle crucial dans l’établissement de cette persistance. Cette protéine est exprimée par un cadre de lecture alternatif chevauchant le cadre de lecture principal du génome viral. <BR> L’objectif de ce travail de mémoire était, d’une part, de préciser la localisation subcellulaire de la protéine L* et, d’autre part, d’identifier les signaux de cette protéine déterminant sa localisation. <BR> Nous avons analysé, par microscopie confoncale, la localisation de la protéine L* exprimée par le virus DA1 ainsi que celle d’une protéine de fusion EGFP-L*. Les images obtenues montrent la colocalisation de la protéine L* et des mitochondries. Cette localisation subcellulaire de la protéine L* contraste avec celle décrite précédemment, qui indiquait une association de cette protéine aux microtubules.<BR> L’association de la protéine L* et des mitochondries indique que cette protéine pourrait avoir une fonction liée à l’apoptose cellulaire. <BR> A partir d’une construction exprimant une fusion EGFP- L*, nous avons construit une série de mutants comportant des délétions de tailles variables des parties N et C-terminales de la protéine L*. A l’exception d’un petit domaine C-terminal, nous n’avons pas pu supprimer de segment de la protéine L* sans perdre la localisation mitochondriale de la protéine de fusion. Ces résultats suggèrent un adressage conformationnel de la protéine L* aux mitochondries ER -